مكان يابي سلولي پروتئين هاي سركوبگر خاموشي در دو ويروس كوتولگي زردي غلات

Subcellular localization of silencing suppressor proteins encoded by two cereal yellow dwarf viruses

ويروس هاي زردي غلات از مخرب ترين ويروس هاي غلات در سراسر دنيا هستند. در اين تحقيق پروتئين هاي P0، سركوب گرهاي خاموشي، در دو ويروس كوتولگي زرد غلات، Cereal yellow dwarf virus-RPV (CYDV-RPV) وCereal yellow dwarf virus- RPS (CYDV-RPS) از نظر محل تجمع و قرارگيري در سلول هاي گياه توتون مورد بررسي قرار گرفتند. بدين منظور ترادف ژن هاي P0 پس از تكثير در آزمون زنجيره اي پليمراز (PCR)، با روش Gateway همسانه سازي شدند. سپس سازه هاي اين ژن ها در اتصال با ژن كد كننده green fluorescent protein (GFP) وارد باكتري Agrobacterium tumefaciens شدند و با تزريق باكتري حامل اين سازه ها به گياه به صورت موقتي بيان شدند. پس از 24 ساعت از زمان تزريق، محل قرارگيري اين پروتئين ها در سلول هاي گياه توسط ميكروسكوپ كانفوكال (confocal) مورد بررسي قرار گرفت. نتايج نشان داد كه محل تجمع پروتئين P0 در هر دو ويروس در هسته و سيتوپلاسم است اما تمايل آنها براي تجمع متفاوت است. به عبارت ديگر پروتئين P0 در ويروس RPV CYDV- در مقايسه با CYDV-RPS تمايل كمتري براي تجمع در هسته دارد در حالي كه پروتئين P0 در ويروس CYDV-RPS بيشتر در هسته متمركز است. در آزمون لكه برداري وسترن با استفاده از آنتي بادي پلي كلونال GFP، پروتئين هاي GFP:P0 رديابي شدند ولي پروتئين GFP به تنهايي ديده نشد كه نشان مي دهد محل هاي تجمع ديده شده مربوط به پروتئين هاي GFP:P0 است.

Cereal yellow dwarf viruses are among the most destructive cereal viruses worldwide. In this study, subcellular localizations of silencing suppressor proteins ( P0) from two cereal yellow dwarf viruses, Cereal yellow dwarf virus-RPV (CYDV-RPV) and Cereal yellow dwarf virus-RPS (CYDV-RPS), were examined via confocal microscopy. To do so, P0 genes were synthesized by polymerase chain reaction (PCR) and were cloned through Gateway cloning system. Agrobacterium. tumefaciens clones harboring GFP:P0 constructs were infiltrated into Nicotiana benthamiana plants. Transient expression of P0 proteins with N-terminal GPF fusion enabled us to examine their subcellular localizations in plant cells, 24 hours post infiltration. Results showed that both proteins are nuclear-cytoplasmic but different tendencies were observed in their localizations. In other words, P0 of CYDV-RPS was more nuclear oriented than P0 of CYDV-RPV. In the Western blot analysis using GFP polyclonal antibody only GFP:P0 proteins but no free GFP, were detected indicating that localizations were related to GFP:P0 proteins.