طراحي، بيان، تخليص و ارزيابي عملكرد قطعه آنتي‌بادي تك زنجيره عليه پروتئين HER2

Design, Expression, Purification, and Evaluation of Anti-HER2 scFv

اهداف: هدف مطالعه حاضر، طراحي و بيان قطعه آنتي‌بادي تك زنجيره عليه پروتئين HER2 در سلول E. coli BL21 (DE3) و بررسي توانايي آن در شناسايي پروتئين HER2 بود. مواد و روش‌ها: ژن كدكننده اين قطعه آنتي‌بادي به طول تقريبي 746جفت باز در وكتور بياني pET28a كلون و پروتئين نوتركيب در سويه E. coli BL21 DE3 بيان شد. به دنبال تخليص قطعه آنتي‌بادي به روش كروماتوگرافي تمايلي، از روش‌هاي وسترن بلاتينگ و الايزا براي بررسي واكنش آنتي‌بادي scFv عليه پروتئين HER2 استفاده شد. يافته‌ها: E. coli قادر به بيان قطعه آنتي‌بادي scFv با عملكرد مناسب عليه HER2 است، به‌طوري كه مي‌تواند اين پروتئين را در سطح سلول‌هاي سرطان پستان نيز شناسايي كند. نتيجه‌گيري: مي‌توان از اين پروتئين در روش‌هاي تشخيصي آزمايشگاهي براي تشخيص اختصاصي پروتئين HER2 استفاده كرد. قابليت اين پروتئين در تشخيص HER2 با استفاده از روش‌هاي ايمونوهيستوشيمي و يا روش‌هاي تصويربرداري بايستي مورد بررسي قرار گيرد.

Aims The aim of the present study was to design and express an anti-HER2 single chain variable antibody fragment in E. coli BL21 (DE3) and evaluate its efficiency in recognition of HER2 protein. Materials & Methods An approximately 746bp encoding gene fragment was cloned into pET28a and the recombinant protein was expressed in E. coli BL21 (DE3) strain. Following protein purification by affinity chromatography, western blotting and ELISA were used to evaluate the efficiency of anti-HER2 scFv against HER2 protein. Findings E. coli can express the anti-HER2 scFv molecule possessing appropriate function and can detect this protein on the surface of breast cancer cells. Conclusion This antibody fragment can be used in laboratory diagnostic methods for HER2 diagnostic approaches. Potential capability of this protein in immunohistochemical and imaging approaches against HER2 should be considered.