بررسي وجود ژن‌هاي مقاوم به كلسيتين(mcr- pmr) در كلبسيلاپنومونيه جداشده از شير خام با روش Multiplex-PCR

Investigation of Clostin-resistant genes (mcr-pmc) in Klebsiella pneumoniae isolated from raw milk by Multiplex-PCR method

كلبسيلا پنومونيه باكتري گرم منفي روده­اي است كه سبب عفونت­هاي بيمارستاني مي­شود. هدف از انجام اين مطالعه بررسي ژنوتيپي ژن‌هاي مقاوم به كلسيتين (mcr- pmr) در كلبسيلا پنومونيه جداشده از شير خام با روش Multiplex-PCR است.از 220 تانك نگهداري شير خام در مراكز نگهداري شير در سال 1397 در تهران نمونه‌برداري صورت گرفت. سويه‌هاي كلبسيلا پنومونيه با استفاده از آزمون‌هاي روتين بيوشيميايي و ميكروبيولوژيكي استاندارد شناسايي شدند.استخراج DNA طبق دستورالعمل كيت تجاري مركز ملي ذخاير ژنتيكي و زيستي ايران (MBK0041) انجام شد. بعد از انجام آزمون PCR در دستگاه ترموسايكلر جهت بررسي حضور ژن‌هاي mcr وpmr محصول نمونه‌ها بر روي ژل آگارز 1% انتقال داده‌شده و با اتيديوم‌برومايد رنگ‌آميزي و سپس در دستگاه ژل داك موردبررسي قرار گرفت. در اين مطالعه به بررسي فنوتيپي و ژنوتيپي دو ژن mcr و pmr، در 60 جدايه باكتري كلبسيلا پنومونيه پرداخته شد. در اين ميان ژن mcr با فراواني 11، (3/18%) و ژن Pmr با فراواني 7، (6/11 %) گزارش شد. رديابي دو ژن موردمطالعه با روش مالتيپلكس PCR انجام شد كه به نظر مي‌رسد اين اولين موردمطالعه بر روي شير و بررسي دو ژن mcr، pmrباشد، كه در ايران از نمونه‌هاي شير جداسازي شده از تانك نگهداري شير در دامداري‌هاي صنعتي از باكتري كلبسيلا پنومونيه صورت گرفته است، و دو ژن مذكور به‌عنوان ماركر اصلي شناسايي شدند.

Klebsiella pneumoniae is a gram-negative intestinal bacterium that causes nosocomial infections. The aim of this study was to evaluate the genotype of calcitonin-resistant genes (mcr-pmr) in Klebsiella pneumoniae isolated from raw milk by Multiplex-PCR. Samples were collected from 220 raw milk storage tanks in Tehran milk storage centers in 1977. Klebsiella pneumoniae strains were identified using standard biochemical and microbiological tests. DNA extraction was performed according to the National Center for Genetic and Biological Resources of Iran (MBK0041) kit. After PCR test in thermocycler apparatus to determine the presence of mcr and pmr genes, the samples were transferred onto 1% agarose gel and stained with ethidium bromide and then analyzed in dock gel apparatus. In this study, 60 genotypes of mcr and pmr genotypes were studied in 60 isolates of K. pneumoniae. Meanwhile, the Mcr gene was reported at a frequency of 11, (18.3%) and the Pmr gene was reported at a frequency of 7 (11.6). The trace of the two genes was investigated by Multiplex-PCR method. This seems to be the first study of two Mcr, Pmr genes, in Iran of milk samples isolated from milk storage tanks in industrial farms from Klebsiella pneumoniae and two of these genes were identified as the main marker.