تعيين مكان بيان كننده گيرنده HCA2 در لوله گوارش موش صحرايي با استفاده از روش ايمونوهيستوشيمي

Immunohistochemical localization of HCA2 receptors in different parts of rat gut

گيرنده هيدروكسي كربوكسيليك اسيد2 ( HCA2 ) هدف داروي نياسين است. در اين مطالعه الگوي بيان اين گيرنده ها در سلول هاي بخش هاي مختلف لوله گوارش (از دهان تا مري) موش صحرايي با روش ايمونوهيستوشيمي توصيف شده است. 6 موش صحرايي نر بالغ از نژاد ويستار تحت بيهوشي آسان كشي شدند. مقاطع بارافيني عرضي 5 ميكروني از مري، معده، دئودنوم، ژژونوم، ايلئوم، سكوم، كولون ها و ركتوم تهيه شد. آنتي بادي اوليه جهت رنگ آميزي ايمونوهيستو شيمي، آنتي بادي چند دودماني خرگوشي ضد HCA2 موش صحرايي (غلظت 1:300 و انكوباسيون به مدت يك شب در 4 درجه سانتي گراد) بود. آنتي بادي ثانويه با HRP كونژوگه شده بود. واكنش ايمني ضعيف در سلول هاي ابي تليال مري و معده غير غده اي، واكنش ايمني قوي مربوط به گيرنده هاي HCA2 در سلول هاي ابي تليال دئودنوم، ژژونوم، ايلئوم و لايه عضلاني ژژونوم ديده شد. بعلاوه واكنش بذيري در كولون اندك بوده و در ركتوم هيچگونه واكنش بذيري ديده نشد. در قاعده سكوم رنگ پذيري سلول هاي پوششي شديد بود. در كل، بروتئين گيرنده هاي HCA2 به فراواني در ابي تليوم روده باريك و قاعده سكوم موش صحرايي حضور دارد، اين امر موش صحرايي را به يك حيوان آزمايشگاهي مناسب جهت مطالعه بر روي اين گيرنده ها در دستگاه گوارش تبديل مي كند.

The hydroxy-carboxylic acid receptor 2 (HCA2 receptor) is the target of niacin. In the present study we describe the expression pattern of these receptors in cells of different parts of alimentary canal (from esophagus to rectum) of rats by immunohistochemical method. Six adult male Wistar rats were euthanized under deep anesthesia. Five μm-paraffin transverse sections were made from esophagus, stomach duodenum, jejunum, ileum, cecum, colons and rectum. The primary antibody for immunohistochemical staining was rabbit polyclonal GPR109A antibody (1:300, incubation for one night at 4°C) which reacts with rat HCA2 receptor. Secondary antibody was HRP-conjugated. We observed weak immunoreactivity in epithelial cells of esophagus and non-glandular stomach, strong immunoreactivity of HCA2 receptors in epithelial cells of duodenum, jejunum, ileum and jejunal muscular layer. Moreover, colon showed weak and rectum showed no immunoreactivity. Immunoreactivity was strong in base of caecum. In conclusion, HCA2 receptor proteins are abundantly present in intestinal epithelium and base of caecum of rats which make them a proper laboratory animal for future studies on these receptors in gastrointestinal tract.