كليدواژه :
آسپرژيلوس , فلاووس , ژن aflR , پسته , RT-PCR
چكيده فارسي :
مايكوتوكسين ها از متابوليت هاي ثانويه قارچ ها هستند كه بوسيله تعدادي از قارچ ها بويژه آسپرژيلوس فلاووس و آسپرژيلوس پارازيتيكوس توليد مي شوند و مي توانند سرطانزا باشند. مواد غذايي در شرايط آب و هواي گرم بستري مناسب براي آلودگي به انواع كپك ها بخصوص گونه هاي آسپرژيلوس توكسين زا هستند و بدنبال آن باعث توليد آفلا توكسين در مراحل مختلف محصول ، هنگام برداشت و حمل و نگهداري آن مي باشند. از آنجايي كه ايران يكي از بزرگترين صادركنندگان پسته درجهان است و يكي از آلودگي هاي مهم پسته آفلاتوكسين است.
هدف از اين پژوهش بررسي بيان ژن aflR در قارچ‌هاي آسپرژيلوس فلاووس توكسين‌زاي جدا شده از پسته هاي شهر رفسنجان به روش مولكولي RT-PCR مي‌باشد. اين ژن نقش تنظيم كننده در بيان ديگر ژن‌هاي مسير بيوسنتز آفلاتوكسين را دارد. در اين پژوهش به طور تصادفي از 10 خشكبار فروشي در نقاط مختلف شهر، نمونه‌هاي پسته‌ي شهررفسنجان جمع آوري و يك مجموعه از1000 نمونه پسته جمع آوري شد، سپس قارچ هاي موجود با تكنيك‌هاي ميكروبي جداسازي شدند. با بررسي‌هاي ماكروسكوپي و ميكروسكوپي وجود قارچ آسپرژيلوس فلاووس، تاييد شد. سپس محتويات ژنومي و RNA قارچ‌هاي توكسين‌زا استخراج ، تخليص و آزمايش RT-PCR جهت بررسي بيان ژن مورد نظر انجام شد. در اين تحقيق 42 سويه قارچ آسپرژيلوس فلاووس جدا شده از پسته‌هاي محصول شهر رفسنجان مورد بررسي قرار گرفت. درنهايت 9 نمونه از 42(4/21%) نمونه‌ي بررسي شده براي ژنaflR داراي بيان و به عبارت ديگر توكسين‌زا بودند.
چكيده لاتين :
Aflatoxins are carcinogenic secondary metabolites produced primarily by the fungal species Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus. Foods and feeds especially in warm climates, are susceptible to invasion by aflatoxigenic Aspergillus species and the subsequent production of aflatoxins during preharvesting, processing, transportation or storage. Since Iran is one of the largest producers of pistachios in the world, the aim of this study is investigation of the expression of aflR gene, one of the most essential genes for producing of Aflatoxin, by molecular method in toxigenic Aspergillus flavus isolated from Rafsanjan’s Pistachio, First time in Iran. Randomly, 1000 Pistachios, were collected from 10 dried fruits wholesales in Rafsanjan city. The species of A. flavus were identified morphologically. In the next step RNA of the A. flavus was extracted. RT-PCR technique was used for amplifying of aflR gene. Consequently, 41 Aspergillus flavus species were isolated from pistachioes. Overall, 9 samples (21.4%) were positive for aflR expression gene. Toxigenic fungus like Aspergillus flavus can grow on nuts which appropriately stored, such as pistachio, corn, peanuts, nuts, wheat and etc. So a molecular method is necessary for exact and rapid detection of these toxigenic fungi. The genes which participate in toxin maturity pathway, like aflR, can be used for valid probing and also were used for this study.
