تاثير امگا3 برميزان متيلاسيون dna اسپرم وساختار هيستولوژيك بيضه رت بعد از درمان با بلئومايسين، اتوپوسايد وسيس پلاتين

Effect of Omega-3 on Rat Sperm DNA Methylation and Histological Structure of Testis after Treatment with Bleomycin, Etoposide and Cisplatin (BEP

در طي روند درمان سرطان، شيمي درماني علاوه بر اثرات مخرب بر روي سلولهاي تومري به بافتهاي سالم نيز آسيب مي رساند و همچنين تعادل سطح اكسيدان و آنتي اكسيدانها بهم مي خورد. لذا هدف از اين مطالعه بررسي تاثير امگا3 به عنوان آنتي اكسيدان بر متيلاسيون dna اسپرم و ساختار بافت بيضه رت بعد از درمان با داروي تركيبي شيمي درماني، تركيب بلئومايسين، اتوپوسايد وسيس پلاتين(bleomycin, etoposide, cisplatine: bep) مي باشد.مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي 40 سر رت نر به صورت تصافي به چهار گروه 10 تايي كنترل،bep، bep +امگا3 و امگا3 تقسيم شدند. گروه كنترل با نرمال سالين 0/9%، به صورت داخل صفاقي و به مدت 18 هفته تيمار شدند. گروه دوم(bep)، ابتدا به مدت 9 هفته نرمال سالين 0/9% را به صورت داخل صفاقي دريافت نمودند. سپس به مدت 9هفته، دارويbep را با دوزmg/kg 5/1، داروي سپس پلاتين و اتوپوسايد را با دوز mg/kg 5/7 به صورت خوراكي از طريق لوله دريافت 5 روز اول هفته و دو روز استراحت و همچنين داروي بلئومايسين را با دوز mg/kg75 به صورت دو روز اول هفته و پنج روز استراحت، دريافت كردند، گروه سوم نيز با داروي bep به روش قبلي تيمار شده و سپس امگا3 را در 9 هفته دوم، به عنوان آنتي اكسيدان به ميزان mg/kg300 روزانه و به صورت خوراكي از طريق لوله دريافت كردند. ميزان متيلاسيون dna اسپرم و ساختار بافت بيضه شامل لوله هاي مني ساز و ضخامت غشاي پايه به ترتيب با كمك رنگ آميزي ايمنوفلورسانس وپريوديك اسيد شيف (pas) پس از دوره درمان 18 هفته در گروههاي مختلف بررسي شد.يافته ها: ميانگين درصد متيلاسيون dna اسپرم در گروه تيمار شده با bep (3/11 ±52/22) به طور معني داري در مقايسه با گروه كنترل (2/92 ±81/80) كاهش يافت (0/001>p). درحاليكه ميانگين درصد متيلاسيون dna اسپرم با مصرف امگا3 بعد از درمان با bep (2/18 ±67) در مقايسه با گروهbep به طور معني داري افزايش يافت (0/01>p). در بررسي بافت بيضه با ميكروسكوپ نوري، در گروه تيمار با bep تعداد سلول هاي اسپرماتوگوني(1/56 ±44/95)، اسپرماتوسيت اوليه(1/45 ±47/60) و همچنين ضخامت اپي تليوم لوله هاي مني ساز (5/64 ±145/5) و غشاي پايه (0/29 ±7/07) در مقايسه با گروه كنترل كاهش داشت (0/001>p). در حاليكه با مصرف امگا3 پس از درمان با bep، بهبود معني داري در تعداد سلولهاي رده زايا و ضخامت اپيتليوم لوله هاي مني ساز وغشاي پايه مشاهده شد(0/01>p).نتيجه گيري: براساس نتايج اين مطالعه امگا3 مي تواند به عنوان يك آنتي اكسيدان اثرات سميت سلولي ناشي از داروهاي شيمي درماني را بهبود بخشد و پيشنهاد مي شود بعد از شيمي درماني براي بيماران سرطاني استفاده شود تا سميت سلولي ناشي از اين داروها را كاهش دهد.

During the cancer treatment course, in addition to the destructive effects on the tumor cells, chemotherapy also damages healthy tissues and disrupts the balance of oxidant and antioxidant levels. The present study was conducted to evaluate the effect of omega-3 on sperm DNA methylation and histological structure of rat testis after treatment with combination chemotherapy using bleomycin, etoposide and cisplatin (BEP). METHODS In this experimental study, 40 male rats were randomly divided into four groups of control, BEP, BEP+omega-3 and omega-3 (n=10). The control group was treated with 0.9% normal saline intraperitoneally for 18 weeks. The second group (BEP) first received 0.9% normal saline intraperitoneally for nine weeks. Then, it received BEP at 5.1 mg / kg for nine weeks, received etoposide and cisplatin at 5.7 mg/kg through gavage on days 1-5 of each week, and then received bleomycin at 75 mg/kg on days 2 of each week. The third group was gavaged with 0.9% saline for 9 weeks and then, orally received 300 mg/kg/day omega-3(capsule containing 1000 mg, 18% EPA and 12% DHA) for 9 weeks and in BEP + omega-3 group treated with BEP based on the same method and then orally received 300 mg/kg omega-3 as an antioxidant for the second nine weeks daily. Sperm DNA methylation and histological structure of rat testis including seminiferous tubules and basement membrane thickness were respectively evaluated by immunofluorescence staining and Periodic acid – Schiff (PAS) after 18 weeks of treatment in all groups. FINDINGS The mean percentage of sperm DNA methylation in the BEP-treated group (52.22±3.11) was significantly decreased compared to the control group (81.80±2.92) (p<0.001). However, the mean percentage of sperm DNA methylation increased significantly with omega-3 use after treatment with BEP (67±2.18) compared with BEP group (p<0.01). In light microscopy of testicular tissue, the number of spermatogonial cells (44.95±1.56), primary spermatocytes (47.60±1.45) as well as the epithelial thickness of seminiferous tubules (145.5±5.64) and basement membrane (7.07±0.29) decreased in the BEP-treated group in comparison with control group (p<0.001). However, the use of omega-3 after treatment with BEP significantly improved the number of germ cells and epithelial thickness of the seminiferous tubule and basement membrane (p<0.01). CONCLUSION Based on the results of this study, omega-3 as an antioxidant can improve the cytotoxic effects of chemotherapy drugs and it is recommended to be used for cancer patients after chemotherapy to reduce the cytotoxicity of these drugs.