پديد آورندگان :
بهرام نژاد، كيا دانشگاه شهيد چمران اهواز - دانشكده ي دامپزشكي - گروه پاتوبيولوژي , راضي جلالي، محمدحسين دانشگاه شهيد چمران اهواز - دانشكده ي دامپزشكي - گروه پاتوبيولوژي , البرزي، عليرضا دانشگاه شهيد چمران اهواز - دانشكده ي دامپزشكي - گروه پاتوبيولوژي , تابنده، محمدرضا دانشگاه شهيد چمران اهواز - دانشكده ي دامپزشكي - گروه بيوشيمي
كليدواژه :
Fasciola hepatica , Polymerase chain reaction , Fasciola gigantica , Restriction fragment length polymorphism
چكيده فارسي :
مقدمه: Fasciolosis يك بيماري انگلي است كه توسط گونه‌هاي Fasciola hepatica، Fasciola gigantica و Fasciola حد واسط ايجاد مي‌گردد. اين بيماري، در طيف گسترده‌اي از گونه‌هاي پستانداران نظير انسان در سراسر جهان شيوع يافته است. روش Polymerase chain reaction-Restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP)، يكي از بهترين روش‌هاي تشخيص گونه‌هاي Fasciola در نقاطي است كه دو گونه‌ي Fasciola hepatica و Fasciola gigantica در دام‌هاي اهلي وجود دارند.
روش‌ها: در اين مطالعه، كرم‌هاي Fasciola از كشتارگاه‌هاي چهار استان غرب كشور ايران جمع‌آوري گرديد. گونه‌هاي انگلي، با استفاده از روش‌هاي ريخت‌شناسي و مولكولي شناسايي شدند. از 715 رأس دام (گاو و گوسفند) مورد بررسي، 92 رأس كبد آلوده به كرم بالغ Fasciola داشتند. 18 كرم بالغ از نظر ريخت‌سنجي بررسي شدند و از تخم اين كرم‌ها، استخراج DNA صورت گرفت. قطعه‌اي از ژنوم نواحي ITS1,5.8S,ITS2 تكثير و با استفاده از آنزيم TasI، آزمون PCR-RFLP روي قطعات تكثير يافته انجام شد.
يافته‌ها: در مجموع، 178 كرم بالغ Fasciola از كبدهاي آلوده‌ي گاو و گوسفند جداسازي گرديد. طي بررسي كه در فصل بهار سال 1396 انجام شد، بيشترين و كمترين آلودگي به ترتيب مربوط به استان ايلام (گاو 28/57 درصد) و استان خوزستان (گوسفند 8/26 درصد) گزارش گرديد. آنزيم TasI در Fasciola hepatica سه قطعه‌ي به طور تقريبي 427، 360 و 117 جفت‌باز و Fasciola gigantica، سه قطعه‌ي به طور تقريبي 360، 220 و 117 جفت‌باز بر روي ژل آگارز 1/5 درصد ايجاد كرد.
نتيجه‌گيري: بر اساس يافته‌هاي اين مطالعه، اندازه‌گيري‌هاي ميكروسكوپي مي‌تواند براي توصيف ميكروسكوپيك گونه‌هاي Fasciola كافي باشد، اما استفاده از روش PCR-RFLP با استفاده از آنزيم TasI ساده‌تر، سريع‌تر و دقيق‌تر مي‌باشد. استفاده از روش PCR-RFLP و نشانگر ژنتيك ITS، جهت شناسايي گونه‌هاي Fasciola بسيار مناسب است.
چكيده لاتين :
Background: Fascioliasis is a parasitic disease caused by Fasciola hepatica, Fasciola gigantica, and intermediate
Fasciola, which is present in a wide variety of mammalian species, including humans, throughout the world. The
polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method is one of the best
methods for detecting Fasciola species in places where there are two types of Fasciola hepatica and Fasciola
gigantica in domestic livestock.
Methods: In this study, Fasciola worms were collected from slaughterhouses in five western provinces of Iran.
Parasitic species were identified using morphological and molecular methods. A total of 756 livestocks (cattle
and sheep) were studied, with 89 livers infected with adult Fasciola worms. 18 worms were morphometrically
examined, and DNA from the eggs of these worms were extracted. A fragment of genome containing
the ITS1,5.8S, ITS2 gene was amplified and utilized by TasI enzyme, and PCR-RFLP was performed on
amplified parts.
Findings: A total of 178 adult Fasciola worm were isolated from infected cattle and sheep livers. During the
spring 2017, the highest and the lowest levels of contamination were reported in Ilam Province (sheep, 28.53%)
and Kermanshah Province (sheep, 7.9%), Respectively. In Fasciola hepatica, TasI enzyme produced three
fragments of 427, 360 and 117 base pair (bp), and for Fasciola gigantica, it produced three fragments of 360,
220, and 117 bp on 1.5% agarose gel.
Conclusion: According to the study, microscopic measurements can be sufficient for microscopic characterization
of Fasciola species, but the PCR-RFLP method using TasI enzyme is simpler, faster, and more accurate. The use of
PCR-RFLP method and ITS genetic marker is very suitable for identification of Fasciola species.
