تشخيص كلستريديوم ديفيسيل و بررسي توكسين‌هاي a و b از مبتلايان به اسهال مزمن با روش‌هاي كشت و pcr

Detection of Clostridium difficile associated diarrhea in disease based on Polymerase chain reaction and bacterial culture an‎d toxin A, B frequency

كلستريديوم ديفيسيل باسيل گرم مثبت، بي‌هوازي اجباري است. تشخيص دقيق و سريع يكي از مسائل مهم در كنترل عفونت كلستريديوم ديفيسيل است. مطالعه حاضر باهدف مقايسه دو روش كشت و واكنش زنجيره‌اي پليمراز در تشخيص كلستريديوم ديفيسيل از بيماران مبتلابه اسهال و بررسي توكسين‌هاي a و b در اين نمونه‌ها است.مواد و روش‌ها: 68 نمونه از بيماران بستري در بيمارستان‌هاي قم جمع‌آوري گرديد. همه نمونه ها به‌سرعت روي محيط ccfa كشت و در شرايط بي‌هوازي گرما گذاري شدند. پس‌ازاين اقدامات، باكتري‌هاي موردنظر جهت استخراج dna و سپس انجام pcr بر روي ژن cdd3جهت تشخيص قطعي باكتري به كار گرفته شد؛ محصول pcr آن 622bp است و براي توكسين‌هاي a و b بايستي قطعاتي با طول 473 و 272 جفت باز گرفته شود.نتايج: مورفولوژي پرگنه‌ هاي كلستريديوم ديفيسيل بر روي محيط هاي مختلف بسيار متفاوت است. از مجموع 68 نمونه مدفوع استفاده‌شده، 11 كشت مثبت به دست آمد. 16 ايزوله كلستريديوم ديفيسيل ازنظر ژن cdd3 مثبت بودند كه در 6 مورد داراي هر دو توكسين و 4 مورد داراي توكسين a و 3 مورد توكسين b را براي اساس ژن‌هاي مورد انتظار دارا بودند.نتيجه‌گيري: روش سيتوتوكسيتي به‌عنوان روش gold standard براي اين باكتري است. به‌منظور پيشگيري از شيوع بالاي اين باكتري، استفاده از روش‌هاي شناسايي بسيار مهم است كه تكنيك pcr در مقايسه با روش‌هاي كشت روشي مناسب براي تشخيص سريع باكتري كلستريديوم ديفيسيل است اين روش در زمان كمتري انجام‌شده و همچنين از اختصاصيت بالايي برخورداراست.

Clostridium difficile is an obligate anaerobic, gram positive bacillus. The purpose of this study was to comparison between PCR technique and bacterial culture for assessing the prevalence of Clostridium difficile infection in the samples of watery diarrhea. Materials & methods This cross-sectional qualitative study was performed in 68 samples of watery diarrhea in Qom province hospitals. All samples were cultured in the specialized CCFA Agar medium. Specific primers were applied for the PCR Assay based on cdd3 gene. Based on this primer PCR product for this gene must be 622bp.toxin A & B diagnosis based on specific primers and product must be 473 and 272 bp Results In this study, the optimized PCR technique was determined to be bacterium in 16 samples. But bacteria diagnosis in 11 samples by culture method. 6 samples have toxin A and B, 4samples has toxin A and 3 samples has toxin B. Conclusion Cytotoxicity method is gold standard for clostridium difficile. Diagnosis of these bacteria is very important and PCR was found as an applicable, sensitive, and quick technique for detection of Clostridium difficile in compromise culture medium method.