مرکز منطقه ای اطلاع رساني علوم و فناوري - كلونينگ و بيان دو ژن مهار كننده متالوپروتئيناز عقرب هميسكور پيوس لپتوروس ( عقرب خطرناك خوزستان )

چكيده فارسي :

يكي از خطرناك‌ترين گون‌هاي عقرب بومي ايران هميسكورپيوس لپتوروس مي‌باشد كه زهر آن بسيار سمي و مسئول بيشتر مرگ و مير‌هاي ناشي از گزش عقرب در ايران است. چهار مهاركننده متالوپروتئيناز (HLMetInhibit1-4) در زهر اين عقرب يافت مي‌شود. مهاركننده‌هاي متالوپروتئيناز از مهم‌ترين پروتئين‌هاي دخيل در بسياري از فرايندهاي سلولي مانند بقاي ماتريكس خارج سلولي مي‌باشند. هدف از اين مطالعه، بررسي ساختار و ويژگي‌هاي دو مورد از اين مولكول‌ها و در ادامه كلونينگ و بيان آن‌ها براي اولين بار مي‌باشد. روش كار: مطالعات بيوانفورماتيكي و داكينگ مولكولي روي توالي‌هاي HLMetInhibit1 و HLMetInhibit2 (با شماره دسترسي MG764541 و MG764542 در NCBI)، صورت پذيرفت. پلاسميدهاي نوتركيب (pET-22b- HLMetInhibit1,2) پس از طراحي و سنتز، به ميزبان E. coli BL21 منتقل شدند، Colony-PCR و الكتروفورز روي ژل آگاروز 1 درصد انجام گرديد و القا بيان پروتئين‌ها در غلظت‌هاي متفاوت IPTG و زمان‌هاي مختلف صورت گرفت. سپس SDS-PAGE و رنگ آميزي با كوماسي بلو و لكه گذاري وسترن انجام شد. يافته‌ها: نتايج داكينگ تمايل اتصالي بيشتري را براي HLMetInhibit1 پيش‌بيني مي‌كرد. كلونينگ ژن‌ها صورت گرفت. بيشترين ميزان بيان پس از 5 ساعت و در غلظت 1 ميلي مولار IPTG مشاهده گرديد. صحت بيان پروتئين‌هاي HLMetInhibit1 و HLMetInhibit2 با وزن‌هاي مولكولي 26 و 17 كيلو دالتون پس از SDS-page و لكه گذاري وسترن تاييد شد. نتيجه‌گيري: كلونينگ و بيان ژن مهاركننده‌هاي متالوپروتئيناز 1 و 2 عقرب هميسكورپيوس لپتروس به عنوان پروتئين‌هايي نوين كه تا كنون مورد بررسي قرار نگرفته‌اند انجام پذير مي‌باشد و اميد است پس از انجام آزمايشات آتي in vitro و in vivo بتوان به كانديدي مناسب براي تحقيق در زمينه‌هاي مختلف درماني دست يافت.