جداسازي و شناسايي آلودگي مايكوپلاسما پنومونيه از كشت هاي سلولي با استفاده از روش كشت و PCR

Isolation and Detection of Mycoplasma pneumoniae from Cell Culture by Culture and PCR

زمينه و اهدف: مايكوپلاسما پنومونيه يكي از گونه هاي اصلي مايكوپلاسماهاي آلوده كننده كشت هاي سلولي محسوب مي شوند. با توجه به اثرات نامطلوبي كه آلودگي هاي مايكوپلاسمايي مي توانند بر روي كشت هاي سلولي داشته باشند، شناسايي سريع اين آلودگي ها حائز اهميت مي باشد. مواد و روش كار: در اين مطالعه جداسازي و شناسايي مايكوپلاسما پنومونيه از 82 نمونه ي كشت سلولي ارسال شده به آزمايشگاه رفرانس مايكوپلاسما با استفاده از روش كشت وPCR انجام شد. بدين منظور از پرايمرهاي M1F و M3R كه قابليت شناسائي جنس مايكوپلاسماها را از ژن 16S rRNA دارد، استفاده گرديد. سپس براي راه اندازي واكنش PCR جهت رديابي مايكوپلاسما پنومونيه، از ژن P1 Adhsein و پرايمرهاي اختصاصي MPF و MPR استفاده شد. يافته ها: از مجموع تعداد 82 نمونه جمع آوري شده، در كشت تعداد (8/37٪)31 نمونه با تشكيل پرگنه اختصاصي، مايكوپلاسما مثبت تشخيص داده شده و (2/62٪)51 نمونه نيز منفي بودند. همچنين از مجموع تعداد مذكور، (53/58%) 48 نمونه از نظر آزمون PCR جنس مايكوپلاسما مثبت بوده و تعداد (47/41%)34 نمونه نيز منفي گزارش شد. نهايتاً از 82 نمونه ي جمع آوري شده در اين مطالعه، هيچ نمونه اي از نظر آزمون PCR گونه مايكوپلاسما پنومونيه مثبت گزارش نگرديد. نتيجه گيري: با توجه به نتايج بدست آمده در اين مطالعه، مايكوپلاسما پنومونيه عامل آلوده كننده كشت هاي سلولي در ايران محسوب نمي شود. همچنين آزمون PCR با توجه به سرعت و دقت بالاي آن، مي تواند آزموني مناسب و مقرون به صرفه تر جهت رديابي مايكوپلاسماهاي آلوده كننده كشت سلولي باشد.

Background: Mycoplasma pneumoniae is one of the major species of mycoplasmas which could contaminate cell cultures. Identification of M. pneuminae is significant because Mycoplasmas could contaminate and have unsuitable effect on the cell cultures. Rapid detection of these contaminations is so important and it could be significant role in preventing and controlling of contamination in cell cultures. The aim of this study is isolation and detection of M .pneumoniae by culture and PCR. 82 cell cultures collected and cultured in PPLO broth media supplemented for M. pnemoniae isolation. Methods: The bacteria DNAs were extracted by phenol/chloroform method and the PCR assay amplifying the conserved region of 16S rRNA gene was applied for the detection of Mycoplasma genus in 163bp fragment and M. pnemoniae in 543bp fragment by using of MPF and MPR primers which obtained from P1 adhesin gen. Results: Of the 82 samples 48(58.5%) yielded one of the potentially pathogenic Mycoplasmas evaluated for using Mycoplasma genus PCR as diagnostic method, and from 48 samples which were positive in genus of Mycoplasma, M. pneumoniae did not detect from those sample by using those primers and there is not any M. pnemoniae detected in this study. Conclusion: Also results of this study indicate that PCR could be an alternative method instead of the culture because according to the results of this study, PCR has high accuracy and speed for detecting M. pneumoniae.