زير همسانه سازي و بيان ژن SO9 گياه غاسول صابوني در باكتري E. coli و بررسي تيتر آنتي بادي آن در موش سوري

زمينه و هدف: غاسول صابوني داراي ايزوفرم هاي مختلف پروتئين ساپورين مي باشد. ساپورين جزء پروتئين هاي غير فعال كننده ريبوزومي (RIPs) است. ايزوفرم SO9 ساپورين ها، آدنين 4324 موجود در توالي حفاظت شده GAGA را دپورينه كرده و باعث اختلال در پروتئين سازي مي‌گردد. در اين مطالعه بيان ايزوفرم SO9 در باكتري E. coli و بررسي تيتر آنتي بادي آن در موش سوري انجام شد. مواد و روش ها: ژن SO9 سنتز شده، از پلاسميد pUC57-SO9 نوتركيب توسط آنزيم هاي محدود كننده BamH1 و Sal1 جدا و در وكتور بياني pET28a(+) زير همسانه سازي شد. بيان پروتئين نوتركيب با IPTG القا گرديد. پروتئين SO9 نوتركيب به وسيله كروماتوگرافي تمايلي نيكل خالص سازي شد. براي تاييد پروتئين نوتركيب از تكنيك Western blotting استفاده شد. واكسيناسيون موش هاي سوري با پروتئين تخليص شده به صورت صفاقي انجام و تيتر IgG سرم به وسيله ELISA بررسي شد.يافته ها: زير همسانه سازي ژن SO9 در وكتور بياني pET28a(+) به وسيله واكنش PCR و هضم آنزيمي تاييد شد. حضور باند پروتئيني 29 كيلودالتون در SDS-PAGE، بيان بالاي پروتئين نوتركيب را نشان داد. پروتئين نوتركيب SO9 به وسيله آنتي بادي پلي كلونال شناسايي شد. بعد از تزريق پروتئين در گروه هاي تست نسبت به گروه هاي كنترل، ميزان تيتر آنتي بادي توليد شده به وسيله تست ELISA اندازه گيري شد.نتيجه گيري: خاصيت ادجوانتي و ايمنوژني آنتي ژن SO9 نوتركيب تخليص شده سبب مي‌شود كه از اين آنتي بادي براي شناسايي ميزان حضور SO9 در گياه غاسول صابوني، به عنوان كانديد واكسن، تهيه كيت تشخيصي و در مطالعات ضد سرطاني سلول هاي انساني استفاده گردد.