كلونينگ و بررسي بيان ژن كد‌كننده كاتپسين L كنه ريپي‌سفالوس آنولاتوس

زمينۀ مطالعه: كنه‌ها از مهم‌ترين انگل‌هاي خارجي مي‌باشند كه باعث ايجاد زيان اقتصادي فراواني در صنعت دامپروري مي‌شوند. لذا تلاش در جهت حذف يا كاهش آن‌ها بر روي دام‌ها بسيار ضروري مي‌باشد. سيستئين پروتئازها از جمله تركيباتي هستند كه نقش مهمي را در اعمال فيزيولوژيك كنه‌ها بر عهده دارند و كانديد مناسبي براي دست يابي به واكسن ضد كنه مي‌باشند. كاتپسين‌ها يكي از مهم‌ترين سيستئين پروتئاز‌ها مي‌باشند. هدف: هدف از اين مطالعه، كلونينگ و بيان قطعه ژني كاتپسين L كنه ريپي‌سفالوس آنولاتوس به‌منظور بررسي ايمنوژنيسيتي آن بوده است. روش‌كار: پس از جمع‌آوري كنه‌ها و تشخيص جنس و گونه آن‌ها اقدام به كشت كنه‌ها گرديد. سپس استخراج RNA از نوزاد كنه‌ها، سنتز cDNA با استفاده از پرايمر اختصاصي كاتپسين و تكثير آن با روش RT-PCR انجام پذيرفت. قطعه ژني موردنظر در پلاسميد بياني pQE30 كلون شد. در ادامه توالي كوتاه‌تري از ژن كاتپسين (654 جفت باز) نيز بصورت پلاسميد صناعي تهيه گرديد. بيان پروتئين حاصل از هر دو پلاسميد نوتركيب در سيستم بيان پروكاريوتي E.ColiBL21 انجام و ايمني‌زايي پروتئين‌هاي نوتركيب حاصل از آن با روش‌هاي سرولوژيك دات بلات و وسترن بلات در مواجهه با سرم خرگوش‌هاي چالش‌يافته با اين پروتئين‌ها و گوساله‌هاي آلوده به كنه مورد بررسي و مقايسه قرار گرفت. نتايج: نتايج مطالعه حاضر نشان داد پروتئين حاصل از پلاسميد نوتركيب صناعي به دليل حلاليت بيشتر بيان و تخليص بالاتري داشت. همچنين سرم خرگوش چالش‌يافته با اين پروتئين‌ها، قابليت شناسايي هر دو پروتئين نوتركيب را داشت. اما شدت واكنش سرم گوساله‌هاي آلوده به كنه با پروتئين‌هاي نوتركيب توليد شده كمتر بود. نتيجه‌گيري نهايي: هر چند شدت واكنش سرم گوساله‌هاي آلوده به كنه با پروتئين‌هاي نوتركيب در مقايسه با سرم خرگوش كمتر بود، اما اين امر با توجه به پنهان بودن آنتي‌ژن كاتپسين در روده كنه دور از ذهن نبود. در مجموع پروتئين نوتركيب كاتپسين ال مي‌تواند به عنوان يك گزينه مناسب در جهت ايمن‌سازي گوساله عليه آلودگي به كنه ريپي سفالوس آنولاتوس به كار رود، هر چند بررسي‌هاي بيشتر در اين زمينه ضروري به نظر مي‌رسد.