روش بهينه براي جداسازي مايكوباكتريوم‌هاي غيرسلي از منابع آبي بيمارستان

Optimized Method for Isolation of Nontuberculous Mycobacteria from Hospital Aquatic Sources

زمينه و اهداف: اكوسيستم هاي آبي مهمترين منابع آبي براي مايكوباكتريوم هاي غيرسلي هستند كه منجر به بيماريهاي مختلف در انسان مي شوند. به دليل انكوباسيون طولاني مدت كشت مايكوباكتريوم ها از منابع آبي، ميكروارگانيسم هاي سريع الرشد و آلودگيهاي محيطي معمولا از رشد مايكوباكتريوم ها جلوگيري مي كنند. در اين مطالعه با مقايسه روشهاي مختلف، روشي كه جداسازي مايكوباكتريوم هاي غيرسلي از منايع آبي را افزايش مي دهد را توضيح داده ايم. مواد و روش كار: در مجموع تعداد 35 نمونه از منابع آبي مانند شير آب و ساير تجهيزات پزشكي مانند مانومتر، دستگاه دياليز، نبولايزر، ونتيلاتور و يونيت هاي دندانپزشكي جمع آوري شد. پس از جمع آوري هر نمونه در فالكون 50 ميلي ليتري، جهت كشت بر روي محيط لون اشتاين جانسون سريعا به آزمايشگاه انتقال داده شد. براي جداسازي بهتر مايكوباكتريوم هاي غير سلي، غلظت هاي مختلف سود، سديم دودسيل سولفات، ستيل پيريدينيوم كلرايد، اسيد اگزاليك و سيكلوهگزيميد مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته ها: محلول سود 3%، اسيد اگزاليك 5% و SDS 3% به طور كامل باكتريهاي آلوده كننده را حذف كرد و داراي كمترين ميزان تاثير مهاري بر روي مايكوباكتريوم ها بود. غلظت 1 الي 0/3 گرم از سيكلوهگزيميد، بهترين اثر مهاري را بر روي رشد قارچها داشت. نتيجه گيري: محيط كشت با غلظت 1-0/3 گرم از سيكلوهگزيميد و تيمار با سود 3%، اسيد اگزاليك 5% و SDS 3% مي تواند جداسازي و كشت مايكوباكتريوم هاي غير سلي از منابع آبي را افزايش دهد.

Background: Aquatic ecosystems are an important source of nontuberculous mycobacteria (NTM) that can cause different diseases in human. Since culture of mycobacteria needs long-term incubation, fast-growing microorganisms and contaminants in the environment usually prevents the isolation of mycobacteria. Here, we compare different treatment protocols and describe a method that increases the recovery and improve the culturability of NTM from aqueous samples. Materials and methods: A total of 35 samples from the water sources like tap water, and medical devices such as manometer, dialysis devices, nebulizers, ventilator and dental units were collected. Containers containing 50 mL of the sample were immediately transferred for culture on Lowenstein-Jensen medium to the laboratory and examined. For better isolation of NTM, different concentrations of NaOH, sodium dodecyl sulphate (SDS), cetylpyridinium chlorid (CPC), oxalic acid and cyclohexamide in culture media were examined. Results: Culture media with 1% solution of NaOH, 3% SDS and 5% oxalic acid was completely effective to eliminate the contaminants and it also showed the lowest inhibitory effect on mycobacteria. The concentrations between 0.3 gr to 1 gr of cyclohexamide had the best inhibitory effect on growth of fungi. Conclusion: Culture media with NaOH 1%, SDS 3%, 5% of oxalic acid and 0.3-1 gr cyclohexamide can increase the recovery and improve the culturability of NTM from aqueous samples.