استفاده از تكنيكqPCR به منظور شناسايي سويه هاي كدكننده توكسين كلستريديوم ديفيسيل

فاقد عنوان لاتين

كلستريديوم ‌ديفيسيل (Clostridium difficile)، باكتري گرم ‌مثبت، بي‌هوازي و اسپوردار بوده و عامل گاستروآنتريتوكوليت با غشاءكاذب است. هنگامي كه ميكروفلور طبيعي روده، توسط فاكتورهاي خطر، مانند درمان با آنتي‌بيوتيك‌ها، شيمي‌‌درماني و غيره آشفته مي‌شود،كلستريديوم ديفيسيل فرصت تكثير يافته و باعث بيماري مي‌شود. عوامل اصلي بيماري‌زايي اين باكتري، دوتوكسينB وAهستند،كه توسط ژن‌هايtcdA وtcdB كد مي‌شوند. هدف از اين تحقيق توسعه روش qPCR به منظور شناسايي عفونت كلستريديوم‌ديفيسيل از طريق طراحي پرايمرهاي اختصاصي براي ژن‌هايtcdAو tcdB مي‌باشد. در اين مطالعه ابتدا با بررسي دقيق نواحي حفاظت‌شده در توالي ژن‌هايtcdAو tcdB، دو جفت پرايمر براي تكثير اختصاصي نواحي مورد نظر طراحي‌شد. سپس بهينه‌سازي روش qPCRبا استفاده از اين پرايمرها انجام‌شد. حساسيت روش با استفاده از غلظت-هاي مختلف DNA باكتري مورد ارزيابي قرارگرفت. علاوه براين، به منظور بررسي اختصاصيت روش از DNA باكتري‌هاي مولد اسهال (اشرشياكلي، شيگلا ديسانتري، سالمونلا تيفي و يرسينا انتروگليتيكا) استفاده شد. در نهايت عملكرد روش بهينه‌سازي-شده با تعداد 100 نمونه باليني مورد ارزيابي قرارگرفت. حساسيت روش به ميزان pg100 از DNA و اختصاصيت روش بهينه-سازي شده 100% تعيين شد. در نمونه‌هاي باليني مورد مطالعه با روش بهينه‌سازي شده 9 مورد مثبت شناسايي شد. با توجه به نتايج بدست آمده استفاده از پرايمرهاي اختصاصي براي ژن‌هاي tcdA و tcdB مي‌تواند به عنوان رويكرد مناسبي براي شناسايي سريع و دقيق عفونت C. difficile در تكنيك qPCR مورد استفاده قرارگيرد.

فاقد چكيده لاتين