كلون سازي ژن tagD هليكوباكتر پيلوري در ناقل يوكاريوتي PFLAG-CMV-3 به منظور ايجاد واكسن ژني

مقدمه: هليكوباكتر پيلوري شايع ترين باكتري مولد التهاب معده، سرطان و لنفوم معده و زخم هاي گوارشي در انسان است. TPX (تيول پراكسيداز) توسط ژن tagD كد مي شود و در كلونيزاسيون اين باكتري در مخاط معده نقش حياتي دارد. محصول ژن tagD سبب تحريك سيستم ايمني در بدن ميزبان مي گردد. هدف از اين تحقيق جداسازي و كلونينگ ژن tagD هليكوباكتر پيلوري در ناقل يوكاريوتي PFLAGCMV3 به عنوان كانديداي واكسن ژني مي باشد. روش كار: در اين مطالعه تجربي، قطعه ژن tagD هليكوباكتر پيلوري به طول 537 جفت باز با استفاده از روش PCR تكثير شد. سپس محصولات PCR با استفاده از كيت كلون سازي شركت ترمو فيشر در وكتور pTZ كلون گرديدند. ساب كلونينگ اين ژن در وكتور بياني يوكاريوتي PFLAGCMV3 انجام شد و سپس با روش الكتروپوريشن به سلول هاي CHO منتقل و بيان گرديد. يافته ها: نتايج حاصل نشان دهنده تكثير و كلون سازي موفق ژن tagD و تشكيل وكتور pTZtagD مي باشد. نتايج هضم آنزيمي و تعيين توالي صحت كلون سازي اين ژن در وكتور PFLAGCMV3 را تاييد كرد. بررسي بيان اين ژن به روش SDSPAGE تشكيل باند 19 كيلودالتوني مربوطه را نشان داد. نتيجه گيري: ژن tagD كلون سازي شده در وكتور نوتركيب PFLAGCMV3tagD توان توليد محصول پروتئيني اختصاصي اين ژن در سلول هاي CHO را دارد. لذا اين سازواره ژني براي بررسي ايمني زايي در مدل حيواني به عنوان واكسن ژني عليه هليكوباكتر پيلوري مناسب به نظر مي رسد.