كلونينگ و بررسي بيان ژن hcpD هليكوباكتر پيلوري

زمينه و هدف: ژن hcpD به عنوان يكي از ژن هاي كد كننده خانواده پروتئين هاي غني از سيستئين هليكوباكتر پيلوري است. اين دسته از پروتئينها سبب تحريك سيستم ايمني ميزبان و توليد آنتي بادي ميگردند. هليكوباكتر پيلوري مستقر در معده انسان سبب بيماريهاي گوارشي نظير: زخم دوازدهه، گاستريت مزمن و سرطان معده ميشود. هدف از اين مطالعه، تكثير، جداسازي و همسانه سازي ژن hcpD هليكوباكتر پيلوري در وكتور pcDNA3.1() و بررسي بيان آن در سيستم يوكاريوتي است. روش كار: در اين مطالعه تجربي، DNA ژنومي از هليكوباكتر پيلوري با استفاده از كيت استخراج DNA تخليص شد. سپس ژن hcpD به روش PCR تكثير و ژن مورد نظر پس از خالص سازي از روي ژل، در وكتور pTZ كلون گرديد. ساب كلونينگ ژن hcpD در وكتور بياني يوكاريوتي pcDNA3.1() انجام شد. صحت مراحل كلون سازي به ترتيب با سه روش PCR، هضم آنزيمي با آنزيم هاي BamHI و EcoRV و نهايتاً تعيين توالي مورد بررسي قرار گرفت. سازه بياني ساخته شده توسط منفذزايي الكتريكي به سلولهاي CHO منتقل شد. بيان ژن در سلولهاي CHO با تكنيكهاي RTPCR و SDSPAGE آناليز شد. يافته ها: نتايج PCR نشان دهنده تكثير قطعه 933 جفت بازي مربوط به ژن hcpD بود. كلونسازي اين ژن در وكتور pTZ، با موفقيت انجام شد و پلاسميد نوتركيب pTZhcpD بدست آمد. هضم آنزيمي و تعيين توالي، مويد درستي ساب كلونينگ ژن و ايجاد سازواره نهايي pcDNA3.1()hcpD است. بيان ژن hcpD در سيستم يوكاريوتي انجام و محصول پروتئيني اين ژن روي ژل SDSPAGE مشاهده شد. نتيجه گيري: سازواره pTZhcpD به عنوان منبعي از ژن chpD هليكوباكتر پيلوري براي تحقيقات آينده نظير توليد پروتئين نوتركيب و ايجاد واكسن نوتركيب در سيستم هاي مختلف ميباشد. از طرف ديگر، بيان موفق ژن hcpD با كمك وكتور نوتركيب pcDNA3.1()hcpD در سلولهاي جانوري CHO، نشان‫دهنده پتانسيل اين وكتور به عنوان واكسن نوتركيب عليه هليكوباكتر پيلوري مي باشد.