تخليص پروتيين نوتركيب هماگلوتينين (HA1) ويروس آنفلوانزا سويه (A(H1N1 و توليد آنتي‌بادي پلي‌كلونال عليه آن

زمينه و هدف: سال هاي اخير ويروس آنفلوانزا نوع (H1N1) A باعث عفونت هاي متوسط تا شديد با ميزان پراكندگي وسيع در سرتاسر دنيا شده است. بنابراين تشخيص افتراقي، سريع و ارزان قيمت بر پايه شناسايي آنتي ژن ها داراي اهميت است. همچنين توليد آنتي بادي اختصاصي عليه آنتي ژن هاي آنفلوانزا براي موفقيت در تحقيقات پايه و پشرفته ضروري است. هماگلوتينين مهمترين گليكوپروتيين سطحي ويروس آنفلوانزا است كه به دو زيرواحد هماگلوتينين ۱ و هماگلوتينين ۲ شكسته مي شود. از آن جايي كه بيشتر مناطق آنتي ژني در ناحيه هماگلوتينين ۱ قرار دارند، بهره گيري از اين دومين به عنوان آنتي ژن، جهت توليد آنتي بادي در اين پژوهش مورد مطالعه قرارگرفت. روش بررسي: پروتيين نوتركيب هماگلوتينين ۱ در پژوهشي تجربي با همكاري بخش آنفلوانزا انستيتو پاستور ايران در نيمه دوم سال ۱۳۹۳ بيان و تخليص شد. در ادامه آنتي بادي پلي كلونال خرگوشي عليه آن در تابستان ۱۳۹۴ توليد شد. پروتيين هماگلوتينين ۱ آنفلوانزا (A/PR/8/34) در وكتور pET28aHA1 در ميزبان پروكاريتي ايشرشياكلي BL21 در مقياس زياد بيان شد. با تغيير پارامترهايي مانند غلظت IPTG، زمان القاء و دماي بيان، بهينه سازي بيان صورت گرفت. سپس پروتيين با استفاده از ستون كروماتوگرافي تمايلي نيكل تخليص شد. يافته ها: توليد آنتي بادي پلي كلونال عليه اين پروتيين نوتركيب پس از تزريق آنتي ژن به همراه ادجوانت فروند بر اساس پروتكلي مشخص، در خرگوش انجام گرفت. همچنين كارايي سرم حاوي اين آنتي بادي با استفاده از روش ELISA ارزيابي شد. تعيين ميزان آنتي بادي در سرم خون هاي جمع آوري شده از خرگوش با استفاده از الايزا مبتني بر سرم، افزايش آنتي بادي اختصاصي را طي دوره ايميونيزاسيون نشان داد. نتيجه گيري: با توجه به داده ها مشاهده مي شود اين آنتي بادي پلي كلونال ظرفيت توليد در خرگوش را داراست و مي تواند در آينده در تست هاي تشخيص آنفلوانزا به مثابه ساير تست هاي ايمني مانند وسترن بلات، ايمونوسيتوشيمي و ايمونوهيستوشيمي مورد استفاده قرار گيرد.