جداسازي و همسانه‌سازي ژن ureE هليكوباكتر پيلوري در ناقل بياني pIRES2-DSRed به‌منظور ايجاد واكسن ژني

زمينه و هدف: هليكوباكتر پيلوري به عنوان يكي از عوامل زخم معده و ايجادكننده سرطان معده قادر است با دارابودن آنزيم اوره آز، در محيط اسيدي معده سال ها زندگي كند. اين آنزيم به منظور فعاليت كاتاليتيكي خود، بهNi2+ و گروهي از پروتئين هاي كمكي از جمله ureE نيازمند است. اوره آز نه تنها فاكتوري لازم براي كلنيزه شدن هليكوباكتر پيلوري است، بلكه با مكانيزم هاي مختلفي باعث بيماري زايي مي شود. با توجه به شيوع بالاي اين باكتري، يافتن راهي براي پيشگيري از وقوع عفونت ضروري به نظر مي رسد. هدف از اين مطالعه، همسانه سازي ژن ureE هليكوباكتر پيلوري در ناقل بياني pIRES2DSRed به منظور ايجاد واكسن ژني بود. روش تحقيق: در اين مطالعه تجربي، ابتدا قطعه ژن ureE به روش PCR تكثير گرديد و با كلون سازي T/A درون وكتور pTZ كلون شد. ساب كلونينگ اين ژن در وكتور pIRES2DSRed با استفاده از آنزيم T4ليگاز انجام شد و در باكتري E. coli سويه Tpo10F ترانسفرم و تكثير شد. سازواره حاصل كه كانديداي واكسن ژني است، براي بررسي بيان ژن در سيستم يوكاريوتي، به روش الكتروپوريشن به سلول هاي CHO منتقل گرديد. بررسي بيان ژن ureE در سلول هاي جانوري با SDSPAGE مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته ها: همسانه سازي ژن ureE در دو وكتور تكثيري pTZ و بياني pIRES2DSRed، با روش هاي PCR، هضم آنزيمي و تعيين توالي تأييد شد. نتايج SDSPAGE مؤيّد بيان موفقيت آميز ژن ureE در سيستم يوكاريوتي سلول هاي CHO بود. نتيجه گيري: سازواره ژني نوتركيب pIRES2DSRedureE قادر به توليد موفق پلي پپتيد حاصل از بيان ژن ureE هليكوباكتر پيلوري در سلول هاي جانوي مي باشد. با توجه به اينكه محصول پروتئيني ژن ureE يكي از پروتئين هاي مهم باكتري مذكور است، بنابراين مي توان از سازواره ايجادشده در اين مطالعه، به عنوان كانديداي واكسن ژني بر ضدّ هليكوباكتر پيلوري در آينده استفاده كرد.