ارزيابي روش ذوب DNA مبتني بر Real-time PCR جهت تشخيص انتروكوك فكاليس و انتروكوك فاسيوم در ايزوله هاي باليني

سابقه و هدف: كندي و خطاي انساني در روش هاي معمول جهت تشخيص دوگونه انتروكوك فكاليس و انتروكوك فاسيوم كه جزء مهمترين گونه هاي بيماريزا در انسان مي باشند، وجود روشهاي دقيقتر را ضروري كرده است. هدف از اين مطالعه طراحي روشي دقيق و سريع با استفاده از تكنيك ذوب DNA با روش Real Time PCR جهت شناسايي و تفكيك اين دو گونه از يكديگر در ايزوله هاي باليني مي باشد. مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي از ايزوله هاي موجود در بانك باكتريايي گروه ميكروب شناسي دانشگاه علوم پزشكي همدان استفاده شد. طراحي پرايمرها با استفاده از نرم افزارهاي اختصاصي و انتخاب ژن هاي divIVA براي تشخيص انتروكوك فكاليس وAlanine racemase براي تشخيص انتروكوك فاسيوم انجام شد. تشخيص ايزوله ها، با بكارگيري روش Real Time PCR و معيار قراردادن دماي ذوب DNA، مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته ها: حساسيت پرايمرهاي طراحي شده براي ژنهاي divIVA (اختصاصي انتروكوك فكاليس) و Alanine racemase (اختصاصي انتروكوك فاسيوم) CFU/ml 15 باكتري بودند. اختصاصيت پرايمرهاي طراحي شده با استفاده از آناليز منحني ذوب دمايي جهت شناسايي انتروكوك فكاليس 76/6 درجه سانتي گراد و جهت شناسايي انتروكوك فاسيوم 80/93 درجه سانتي گراد بود كه در مقايسه با ارگانيسم هاي ديگر اختلاف قابل توجهي را نشان داد. نتيجه گيري: بر اساس اين مطالعه، پرايمرهاي طراحي شده داراي حساسيت و اختصاصيت مناسبي جهت تشخيص و افتراق گونه هاي انتروكوك فاسيوم و انتروكوك فكاليس بودند