بيان پروتئين نوتركيب Hsp20-Nef به‌منظور ارزيابي ايمنوژنيسيتي آن در مقابل HIV-1 Nef توسط الايزاي غيرمستقيم

اهداف: پروتئين Nef به عنوان هدف جذاب براي توسعه واكسن درماني HIV۱ در نظر گرفته شده است. به علاوه، خواص ايمني زايي قوي پروتئين هاي شوك حرارتي (HSPs) منجر به استفاده از آنها به عنوان ايمونومدولاتور و حامل آنتي ژني براي طراحي واكسن هاي ساب يونيتي شد. در مطالعه اخير، بيان پروتئين فيوژن Hsp۲۰Nef در سيستم بياني اشرشيا كلي (E. coli) انجام شد و بررسي ايمنوژنيسيتي آن در موش هاي بالب/سي صورت گرفت. مواد و روش ها: در ابتدا، بيان پروتئين نوتركيب Hsp۲۰Nef در سويه هاي باكتري اشرشيا كلي BL۲۱ و Rosetta توسط SDSPAGE و وسترن بلات با استفاده از آنتي بادي منوكلونال ضد Nef بررسي شد. سپس، تخليص پروتئين نوتركيب توسط تكنيك رنگ آميزي معكوس انجام شد. درنهايت، توانايي آن براي القاي پاسخ آنتي بادي در مقابل آنتي ژن HIV۱ Nef با استفاده از ELISA غيرمستقيم ارزيابي شد. يافته ها: نتايج ما باند واضح حدود ۱۲۳۰جفت باز مرتبط با فيوژن Hsp۲۰Nef روي ژل آگارز نشان داد كه نشانگر كلونينگ صحيح ژن در وكتور pET۲۸a بود. بيان پروتئين Hsp۲۰Nef به صورت باند واضح حدود ۴۷كيلودالتون در SDSPAGE و وسترن بلات تاييد شد. در سنجش ايمنولوژيكي، پروتئين Hsp۲۰Nef و نيز پروتئين Nef امولسيفيه شده با ادجوانت فروند به طور مهمي سطح IgG تام را در مقايسه با گروه هاي ديگر افزايش دادند. به علاوه، ايمنوژنيسيتي Hsp۲۰Nef بالاتر از Freund rsquo;s adjuvant/Nef در رژيم هاي پروتئيني بود ((P 0/05). نتيجه گيري: پروتئين فيوژن Hsp۲۰Nef به طور موثري در سيستم پروكاريوتي E. coli بيان شد و به طور مهمي پاسخ آنتي بادي را در مقابل آنتي ژن HIV۱ Nef القا كرد.