سنجش لوسيفراز روشي براي نشان‌دادن صلاحيت ميكروRNA let-7bانتخابي در سركوب تكثير ويروس هپاتيت C

اهداف: توسعه عوامل ضدويروسي جديد رويكردي مناسب براي ريشه‌كن‌شدن عفونت هپاتيت C است. به‌دليل عدم وجود مدل‌هاي حيواني مناسب همواره سدي براي ارزيابي مناسب تركيبات ضدويروسي در محيط زنده وجود دارد. توجه روزافزون به microRNAها نقطه قوت جديدي در درمان‌هاي ضدويروسي محسوب مي‌شود. هدف از مطالعه حاضر، استفاده از سنجش لوسيفراز براي تاييد ميان‌كنش بين miRNA و RNA ژنومي ويروس هپاتيت C (HCV) ژنوتيپ 1b به‌منظور سركوب تكثير اين ويروس است. مواد و روش‌ها: قطعات ژنومي NS5B از ژنوم ويروس هپاتيت C به‌عنوان ناحيه MRE درون وكتور psiCHECK2TM ساب‌كلون شد. بيان نسبي وكتورهاي لنتي‌ويروس بيان‌كننده miRNA در سلول Huh7.5 از طريق ميكروسكوپ فلورسانس و realtime PCR ارزيابي شد. لنتي‌ويروس بيان‌كننده let7b به سلول‌هاي Huh7.5 ترانسداكت شد. NS5BpsiCHECK2TM (MRE) به سلول Huh7.5 مورد نظر ترانسفكت شد. به كمك كيت سنجش دوگانه لوسيفراز بيان نسبي لوسيفراز اندازه‌گيري شد.يافته‌ها: با استفاده از لنتي‌ويروس‌هاي بيان‌كننده let7b شرايط بيان بالا و دايمي از let7b در سلول مورد نظر ايجاد شد. از سوي ديگر اتصال اختصاصي توالي پاسخ دهنده (NS5B) به ميكروRNA let7b با كاهش نور لوسيفراز نشان داده شد.نتيجه‌گيري: براي حفظ بيان بالا و پايدار ميكروRNAها در سلول از وكتورهاي لنتي‌ويروس استفاده مي‌شود. استفاده از سنجش لوسيفراز يكي از مناسب‌ترين روش‌هاي تاييد ميان‌كنش بين miRNAmRNA است كه مي‌تواند براي ژن‌هاي ويروسي ديگر با ميكروRNAهاي متفاوت استفاده شود.