كلونينگ و بيان نواحي آنتيژنيك ژن CagA هليكوباكتر پيلوري در باكتري اشرشياكلي

زمينه و هدف: هليكوباكتر پيلوري شايع ترين پاتوژن گوارشي است كه نيمي از مردم دنيا را آلوده ساخته و مهمترين علت بيماريهاي معدهايرودهاي از جمله گاستريك مزمن، زخم معده و دوازدهه، سرطان معده و لنفوما است. ژن CagA )سيتوتوكسين مرتبط با ژن A ( يكي از مهمترين شاخصهاي بيماري زاي اين باكتري است. هدف از اين تحقيق ساخت ناقل نوتركيب حامل نواحي آنتيژنيك ژن CagA و بيان آن در ميزبان بياني ميباشد. مواد و روشها: براي رسيدن به اين هدف بر اساس برنامههاي بيوانفورماتيكي ناحيهاي از ژن CagA كه داراي بالاترين خاصيت آنتيژنيك بود شناسايي شده و بر اساس آن قطعهاي به طول 996 جفت باز با استفاده از روش PCR تكثير شد. اين قطعه با استفاده از هضم آنزيمي در ناقل pET32a كلون و سپس به داخل باكتري E.coli سويه BL2I(DE3) ترنسفورم و بيان گرديد. نتايج: نتايج توالي يابي كلونينگ موفق ژن CagA را در حامل بياني نشان داد. وزن مولكولي پروتئين نوتركيب توليد شده بر روي ژل SDS-PAGE ، 57 كيلو دالتون بر آورد شد و صحت بيان پروتئين تاييد گرديد. نتيجه گيري: بر اساس نتايج اين مطالعه كلونينگ ناحيه اپي توپي مورد نظر با موفقيت انجام شده و احتمالا ميتوان پروتئين نو تركيب به دست آمده را به عنوان كانديداي مناسبي براي توليد IgY حاصل از مرغهاي ايمن شده براي كنترل عفونت هليكوباكتر پيلوري در انسان، طراحي كيتهاي تشخيصي و توليد واكسن هليكوباكترپيلوري معرفي نمود .