كلون كردن اپي توپ هاي خطي تحريك كننده ي لنفوسيت T آنتي ژن EG95 اكينوكوكوس گرانولوزوس در وكتور pGEX4t1 و بررسي بيان آن با روش SDS-PAGE

زمينه و هدف: انگل اكينوكوكوس گرانولوزوس عامل بيماري مشترك بين انسان و دام به نام كيست هيداتيك يا هيداتيدوزيس است؛ موفق ترين واكسن نوتركيب عليه اين بيماري از كلون كردن ژن كد كننده آنتي ژن 25 كيلو دالتوني آن يعني EG95 در وكتور pGEX مي باشد كه ايمني سلولي و همورال قابل توجهي را در گوسفندان ايجاد كرده است اما با توجه به نقش ايمني سلولي TH1 در غلبه بر اين بيماري و نقش اپي توپ هاي خطي در تحريك اين نوع سيستم ايمني جهت بهينه سازي شرايط واكسن موجود در مطالعه حاضر تنها توالي كد كننده اپي توپ هاي خطي تحريك كننده لنفوسيت T اين آنتي ژن كلون و بيان شد.مواد و روش ها: با استفاده از نرم افزار IEDB توالي كد كننده ي اپي توپ هاي خطي آنتي ژن EG95 پيش بيني و سنتز شد. تكثير قطعه موردنظر با PCR انجام و بعد از هضم آنزيمي آن و وكتور pGEX4T1 با آنزيم xhoI، در وكتور با روش شوك حرارتي كلون گرديد. كلوني هاي مثبت با روش colony PCR با استفاده از پرايمرهاي مختلف انتخاب شده و بيان پروتئين نوتركيب در سلول BL21 با 10%SDS-PAGE موردبررسي قرار گرفت.نتايج: تكثير توالي كد كننده اپي توپ هاي EG95 با PCR انجام و قطعه موردنظر در وكتور pGEX4T1 كلون گرديد. تأييد پلاسميد نوتركيب با colony PCR و اختلاف اندازه وكتور طبيعي و نوتركيب صورت گرفت. بيان پروتئين نوتركيب آنتي ژن نيز به وضوح با SDS-PAGE مشخص شد.نتيجه گيري: قطعه EG95 به طور موفقيت آميزي در وكتور pGEX4T1 كلون و در سلول BL21 بيان شد.