كلونينگ و بيان ژن نانوبادي عليه انتروتوكسين B باكتري استافيلوكوكوس اورئوس

زمينه و هدف: باكتري استافيلوكوكوس اورئوس با ترشح انتروتوكسين هاي متعدد باعث بيماري هاي مختلف مي شود، به همين دليل روش هاي مؤثر و آسان شناسايي انتروتوكسين ها موردنياز است. امروزه غالباً از روش هاي ايمونوشيميايي برمبناي آنتي بادي هاي مونوكلونال استفاده مي شود. در سرم خون خانواده شترسانان آنتي بادي هاي زنجيره سنگين يافت شده كه VHH يا نانوبادي ناميده مي شوند. خصوصيات منحصربه فرد اين آنتي بادي ها از قبيل اتصال به مولكول هاي كوچك نظير توكسين ها، آن ها را كانديدهاي جذابي براي توسعه تركيبات دارويي نموده است. براي دستيابي به مولكول VHH عليه انتروتوكسين B استافيلوكوكوس تحقيق حاضر انجام شده است. مواد و روش ها: غني سازي كتابخانه ي فاژي به منظور جداسازي نانوبادي هاي اختصاصي عليه توكسين در كارهاي قبل انجام شده بود. در ادامه وكتور pCANTAB 5E حاوي VHH از باكتري E.coli سويه xl1blue، استخراج و پس از انجام واكنش PCR با پرايمرهاي مربوطه، ساب كلونينگ در وكتور بياني (+)pET21a با مكان هاي برش NdeI و XhoI صورت گرفت. ترانسفورماسيون وكتور درون باكتري E.coli سويه بياني (DE3) BL2I انجام شد. سپس سلول ها تحت القاي IPTG قرار گرفتند و زمان و شرايط توليد بهينه گرديد، درنهايت بيان پروتئين توسط تكنيك SDSPAGE و وسترن بلات مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج: براي تأييد كلونينگ ژن نانوبادي درون وكتور pET21a(+)، توالي نوكلئوتيدي ژن آناليز و ترانسفورم به باكتري E.coli سويه DE3))BL21 با موفقيت انجام شد. پس از القاء، پروتئين فعال درون سلول توسط روش SDSPAGE مشاهده و توسط لكه گذاري وسترن تأييد شد. نتيجه گيري: در اين تحقيق كلونينگ، ساب كلونينگ و بيان ژن نانوبادي انجام شد. توليد اين پروتئين نوتركيب مي تواند گامي مهم در جهت توسعه روش هاي درماني جديد و يا توليد واكسن عليه انتروتوكسين B باكتري استافيلوكوكوس اورئوس بردارد.