كلون‌سازي، بيان و تخليص پروتئين اينتگراز ويروس HIV و بررسي آنتي‌ژنيسيته آن

زمينه و هدف: ارتقاء روش‌هاي تشخيصي جهت شناسايي افراد آلوده به HIV، يكي از راه‌هاي مقابله با انتشار ويروس به‌شمار مي‌رود. به‌دليل بالابودن ميزان موتاسيون‌ در اين ويروس، لازم است تا براي راه‌اندازي روش‌هاي ايمنواسي تشخيصي از پروتئين‌هاي محافظت‌شده، استفاده شود. به‌دليل آنكه پروتئين اينتگراز يكي از محافظت‌شده‌ترين پروتئين‌هاي HIV است، آنتي‌ژن مناسبي براي اين منظور به‌شمار مي‌رود. در اين مطالعه ضمن كلون‌سازي و تخليص اين پروتئين، ايمنوژنيسيته آن نيز مورد بررسي قرار گرفته است. روش كار: ژن اينتگراز در وكتور بياني pET28a كلون گرديد. پلاسميد نوتركيب حاصله به باكتري E.coli انتقال يافته و بيان پروتئين با استفاده از IPTG القاء شد. بررسي ايمنوژنيسيته پروتئين بيان‌شده با تكنيك وسترن‌بلات صورت گرفت. تخليص پروتئين با استفاده از كروماتوگرافي ميل تركيبي با رزين‌هاي NiNTA انجام پذيرفت. يافته‌ها: القاء باكتري‌هاي ترانسفرم‌شده با IPTG به بيان پروتئين اينتگراز منجر گرديد و به اين ترتيب پس از بهينه‌سازي شرايط بيان، حدود 40 درصد پروتئين‌هاي باكتريايي به پروتئين نوتركيب مورد نظر اختصاص پيدا كرد. انجام وسترن بلات نشان‌دهنده واكنش ايمني اختصاصي با سرم افراد آلوده به HIV بود. به‌ازاء هر يك ليتر كشت باكتري، 75 ميلي‌گرم اينتگراز تخليص گرديد. نتيجه‌گيري: پروتئين توليدشده به‌واسطه حفظ خاصيت آنتي‌ژنيك خود، قابليت به‌كارگيري در روش‌هاي تشخيصي ايمنواسي را دارد. با استفاده از بهينه‌سازي شرايط كشت و بيان پروتئين مي‌توان به باكتري‌هاي نوتركيبي دست‌ يافت كه توليد پروتئين در آن‌ها با بازده بالايي صورت مي‌پذيرد و بنابراين امكان استفاده از آن‌ها در اهداف صنعتي وجود خواهد داشت.