همسانه سازي و بيان ژن مولد پپتيد AcAMP از قارچ Aspergillus clavatus در باكتري E. coli و بررسي تيتر آنتي بادي آن در موش سوري

زمينه و هدف: پپتيدهاي ضد ميكروبي به عنوان منادي تغيير آنتي بيوتيك هاي امروزي مورد توجه قرار گرفته اند. پپتيد ضد ميكروبي AcAMP يكي از اين موارد بوده كه از قارچ رشته اي ES1 Aspergillus clavatus تخليص و خواص بيوشيميايي آن بررسي گرديده و مشخص شد كه اين پپتيد داراي خواص منحصر بفردي مي باشد. هدف اين مطالعه، بيان ژن مولد پپتيد AcAMP در باكتري E. coli و بررسي تيتر آنتي بادي آن در موش مي باشد. روش كار: در اين مطالعه تجربي ژن مولد پپتيد AcAMP با جايگاه هاي آنزيمي BamHI و SalI از پلاسميد pUC57 با استفاده از PCR، تكثير و در وكتور بياني pET28a(+) همسانه سازي و به باكتري اشريشيا كولي سويه BL21(DE3) تراريخت شد. بيان پروتئين نوتركيب AcAMP با IPTG القاء و به وسيله كروماتوگرافي تمايلي نيكل تخليص گرديد. به منظور تأييد پروتئين نوتركيب western blotting انجام گرفت. موش ها به صورت صفاقي با پروتئين تخليص شده ايمن شدند و تيتر IgG سرم به روش ELISA مورد سنجش قرار گرفت. يافته ها: عمل همسانه سازي در وكتور بياني pET28a(+) به وسيله واكنش PCR و توالي يابي تائيد گرديد. پروتئين نوتركيب 9 كيلودالتوني توليد شده به وسيله SDSPAGE و لكه گذاري وسترن مورد تأييد قرار گرفت. روند توليد آنتي بادي با استفاره از الايزا غير مستقيم نشان دهنده ي روند افزايشي آنتي بادي مخصوصاً پس از تزريق چهارم مي باشد. نتيجه گيري: از پپتيد AcAMP نوتركيب تخليص شده و آنتي بادي توليد شده مي توان در تحقيقات ضد ميكروبي اعم از بررسي عملكرد ضد ميكروبي پپتيد نوتركيب و شناسايي پپتيد در كاربرد هاي مختلف استفاده نمود.