بيان كاست ژني SO6-STxB در باكتري اشرشيا كلي و بررسي تيترآنتي‌بادي

زمينه و هدف: يكي از راه هاي تقويت اثر واكسن ها استفاده از ياور ها مي باشد. STxB باكتري شيگلا داراي نقش ياوري و حاملي بوده و مي توان با تركيب كردن آنتي ژن هاي كانديداي واكسن با اين ياور به توليد واكسن مناسب پرداخت. غاسول صابوني گياهي داراي فعاليت انگليكوزيداز مي باشد. ايزوفرم 6 اين گياه (SO6)، آدنين 4324 را در توالي حفاظت شده GAGA در 28SrRNA پورين زدايي كرده و سنتز پروتئين را مختل مي كند. هدف اين مطالعه، بيان ژن SO6STxB در باكتري اشرشيا كلي و بررسي تيتر آنتي بادي آن در موش مي باشد. روش كار: در اين مطالعه تجربي ژن SO6 با جايگاه هاي آنزيمي BamHI و SalI از پلاسميد pUC57 جداسازي گرديد و در وكتور بياني pET28a(+) حاوي ژن STxB زيرهمسانه سازي و به باكتري اشرشيا كلي سويه BL21(DE3) تراريخت شد. بيان پروتئين نوتركيب SO6STxB توسط IPTG القا و تخليص به وسيله كروماتوگرافي تمايلي ستون نيكل انجام گرديد. تأييد پروتئين نوتركيب با استفاده از وسترن بلات انجام گرفت. موش ها به صورت صفاقي با پروتئين تخليص شده واكسينه شدند و تيتر IgG سرم به روش ELISA مورد سنجش قرار گرفت. يافته ها: زيرهمسانه سازي ژن STxBSO6 در وكتور بياني pET28a(+) به وسيله واكنش PCR و هضم آنزيمي، تائيد شد. پروتئين نوتركيب 5/37 كيلودالتوني توليد شده به وسيله SDSPAGE و لكه گذاري وسترن تأييد شد. سپس آنتي بادي توليد شده از سرم موش جداسازي و توسط الايزا اندازه گيري گرديد. نتيجه گيري: آنتي ژن STxB-SO6 نوتركيب تخليص شده مي تواند براي تحقيقات ضد سرطاني و كانديد واكسن استفاده شود.