تشخيص مايكوباكتريوم توبركلوزيس در مايع مفصلي بيماران مبتلا به ارتريت با استفاده از روش PCR

Detection of Mycobacterium tuberculosis in synovial fluid from patients with arthritis using PCR

آرتريت باكتريايي يكي از انواع آرتريت­هاي شناخته شده است كه به­سرعت باعث تخريب مفاصل مي­شود. از بين باكتري­هاي مولد آرتريت عفوني، مايكوباكتريوم تربركلوزيس (MTB) يكي از باكتري­هايي است كه مي­تواند به ­طور نادر ايجاد كننده اين عارضه باشد. هدف از اين مطالعه بررسي وجود مايكوباكتريوم تربركلوزيس در مايع مفصلي بيماران مبتلا به آرتريت از طريق روش PCR است. مواد و روش­ها: اين مطالعه بر روي مايع مفصلي 70 بيمار مراجعه كننده به بيمارستان شريعتي تهران كه دچار آرتريت بوده ­اند صورت گرفت. DNA از مايع مفصلي اين 70 بيمار با روش فنل كلروفرم استخراج شد. پرايمر، براي ژن هدف IS6110 انتخاب و بعد از تأييد حساسيت و اختصاصيت، تست PCR بهينه بر روي نمونه‌ها انجام و مورد ارزيابي قرار گرفتند. يافته­ ها: تست PCR بهينه و آمپليكون bp 317 به­وسيله آگاروزژل الكتروفورز %5/1 مشاهده گرديد. حد تشخيص تست 100 و با ويژگي صد درصد ارزيابي گرديد. DNA مايكوباكتريوم توبر كلوزيس در 4 نمونه مايع مفصلي بيماران مبتلا به آرتريت (%7/5) ديده شد. نتيجه­ گيري: اولين قدم در درمان بيماري، تشخيص درست و سريع آن است. مايكوباكتريوم توبركلوزيس مشخصه­ هايي از قبيل رشد كند دارد كه شناسايي اين باكتري را از طريق كشت و تست­هاي بيوشيميايي مشكل و طاقت فرسا مي­كند. نتايج اين مطالعه مؤيد آرتريت‌هاي مايكوباكتريوم توبركلوزيس موجود است كه تشخيص سريع و به ­موقع آن­ها از طريق PCR امكان درمان صحيح آن­ها را مهيا مي­نمايد.

Aim and Background: Bacterial arthritis is one of the arthritis diseases known that can rapidly cause joint damage. Among the bacteria causing septic arthritis, Mycobacterium tuberculosis (MTB) is one of those that rarely produce arthritis. The aim of this study is to examine the presence of MTB in synovial fluid of patients with arthritis using Polymerase Chain Reaction (PCR) Materials and Methods: This study was carried out on 70 synovial fluid samples gathered from Shariati Hospital. DNA was extracted using Phenol-Chloroform standard extraction technique. PCR test optimized on the basis of IS6110 target gene. Samples were analyzed by PCR test after evaluation of specificity and sensitivity of PCR. RESULT: PCR test was optimized and the 317-bp amplicon detected by 1.5% agarose gel electrophoresis. Limit of detection (LOD) was estimated as 100 copy/Reaction. MTB DNA was detected in 4 (5.7%) synovial fluid samples of patients with arthritis. CONLUSION: First step in treatment is rapid and accurate diagnosis. MTB have some characteristics including slow generation making the identification difficult and exhausting through culturing and biochemical tests that sometimes leads to ambiguous results. Results of this study confirm that MTB could play a role in bacterial arthritis and rapid diagnosis using PCR provides us with accurate treatment.