تشخيص انگل ليشمانيا در بيماران توسط كشت NNN و PCR-RFLP

مقدمه: ليشمانيوز يك بيماري عفوني انگلي با انتشار وسيع در مناطق معتدله و گرمسيري است. هدف اين مطالعه به كار گيري دو روش PCR-RFLP و كشت NNN (Novy-Nicol-Mac Nea) در نمونه‌هايي بود كه اسمير مستقيم آن‌ها از نظر وجود آماستيگوت منفي بود. روش‌ها: اين مطالعه جهت بررسي و تعيين گونه‌هاي Leishmania در منطقه‌ي اصفهان بر روي DNA استخراج شده از انگل‌هاي حاصل از كشت بيماران اسمير منفي با روش PCR-RFLP (Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism) انجام شد. جهت كشت انگل مقداري ا ز نمونه‌ي برداشت شده از بيمار بر روي محيط NNN و RPMI 1640 برده شد. از مجموع 100 نمونه اسمير منفي 50 نمونه در محيط كشت از نظر پزوماستيگوت‌هاي انگل Leishmania مثبت شد و DNA حاصل از كشت نمونه‌ها استخراج گرديد. بعد از استخراج DNA با استفاده از روشPCR-RFLP تكثير از توالي ITS1با پرايمرهاي اختصاصي صورت گرفت و بعد از هضم با آنزيم HaeIII ايزوله‌ها در مقايسه با سويه‌هاي استاندارد تعيين گونه شدند. يافته‌ها: از مجموع 50 نمونه‌ي اصفهان 46 نمونه L.major و 4 نمونه L.tropica تشخيص داده شد. نتيجه‌گيري: مطالعه‌ي حاضر نشان داد كه PCR-RFLP روشي حساس و دقيق براي تعيين گونه‌هاي عامل ليشمانيوز جلدي است و ضايعات مورد مطالعه در منطقه‌ي اصفهان ناشي از L.major و L.tropica مي‌باشد.