ساخت و ارزيابي يك سازه‌ي DNA بيان‌كننده‌ي پروتئين Core ويروس هپاتيت C متصل به آنتي‌ژن S ويروس هپاتيت B به عنوان يك كانديد واكسن

مقدمه: با وجود اين كه ويروس هپاتيت C (Hepatitis C virus يا HCV) يكي از عوامل مهم ايجاد‌كننده‌ي بيماري‌هاي مزمن كبدي مي‌باشد، هنوز واكسن مناسبي براي آن تهيه نشده است. هدف از اين مطالعه، ساخت يك سازه‌ي بيان‌كننده‌ي تواليCore (aa: 1-122) ويروس هپاتيت C متصل به آنتي‌ژن S ويروس هپاتيت B (HBsAg يا Hepatitis B surface antigen) و تأييد بيان آن در سلول‌هاي يوكاريوتي بود. روش‌ها: در ابتدا توالي Core اين ويروس با استفاده از پرايمرهاي داراي جايگاه برش آنزيمي BamHI/EcoRV از روي وكتور pIVEX2.4a حاوي اين ژن تكثير شد و در وكتور pCDNA3.1 حاوي HBsAg خطي‌شده با آنزيم‌هاي مذكور كلون گرديد. ارزيابي و تأييد ساختار نوتركيب به وسيله‌ي برش آنزيم‌هاي محدودكننده و در نهايت تعيين توالي صورت گرفت. پلاسميد ساخته‌شده‌ي نهايي (pCHCORE) در رده‌ي سلولي HEK293T ترانسفكت شد و ارزيابي نهايي بيان توسط تست Western blot بر روي سلول‌هاي HEK293T ترانسفكت‌ شده به وسيله‌ي آنتي‌بادي پلي‌كلونال آنتي HBsAg موشي انجام شد. يافته‌ها: توالي ژن (122-1)Core ويروس هپاتيت C با موفقيت تكثير گرديد و نتايج ارزيابي، برش آنزيمي و تعيين توالي تأييدكننده‌ي صحت ساختار نوتركيب pCHCORE و كلونينگ انجام ‌شده بود. نتيجه‌ي Western blot بيانگر انتقال موفق پلاسميد و بيان ژن هدف در سلول‌هاي يوكاريوتي بود. نتيجه‌گيري: با توجه به ساخت و بيان موفقيت‌آميز ساختار HBS-core در سلول‌هاي يوكاريوتي و به دليل احتمال افزايش پاسخ‌هاي ايمني توسط آنتي‌ژن HBS به صورت فيوژن با پروتئين Core (بر اساس تحقيقات قبلي)، سازه‌ي بياني حاوي ژن Core ويروس هپاتيت C متصل ‌شده به اين آنتي‌ژن، ممكن است باعث القاي بيشتر پاسخ‌هاي ايمني عليه پروتئين Core شود و بتواند به عنوان واكسن مؤثر به منظور كنترل عفونت HCV به كار رود.