استفاده از آزمون لكه گذاري نقطه اي با پيكره بورخولدريا مالئي براي تشخيص بيماري مشمشه در ايران

Use of Dot-blot technique by Burkholderia mallei for the serodiagnosis of glanders in Iran

مشمشه يكي از مهم­ترين بيماري هاي قابل انتقال از حيوانات تك سمي بوده كه عامل آن بورخولدريا مالئي است. با توجه به كانون بيماري در ايران و احتمال آلودگي انسان و خطرات ناشي از انتقال اين باكتري، شناسايي سريع آن در حيوانات از اهميت زيادي برخوردار مي باشد. لذا هدف از اين مطالعه طراحي يك روش تشخيص سريع شامل لكه­نمايي نقطه‌اي براي تعيين حضور حضور آنتي‌بادي بود. براي اين منظور 40 نمونه سرم اسب از استان‌هاي مختلف اخذ و به همراه نمونه آنتي­ژن پيكره باكتري بورخولدريا مالئي (كنترل مثبت) و سرم اسب­هاي سالم (كنترل منفي) مورد آزمون قرار گرفتند. غلظت بهينه آنتي‌ژن-آنتي‌بادي با استفاده از چكر بورد براي سرم هاي مثبت و منفي مشخص گرديد. پس از طراحي آزمون لكه­ گذاري نقطه ­اي، آنتي ژن روي چاهك كاغذ نيتروسلولز قرار داده شد و تثبيت آنتي­ژن با محلول بلاكينگ و سپس افزودن سرم اسب مشكوك به همراه كنترل مثبت و منفي انجام شد. در ادامه به آن آنتي­بادي كونژوگه اضافه و نهايتا با افزودن سوبسترا به چاهك ها نتيجه‌ي واكنش به صورت ايجاد رنگ قرائت گرديد. در اين بررسي از 40 نمونه، شش مورد مثبت شناسايي گرديد. با در نظر گرفتن مالئيناسيون به عنوان آزمون استاندارد و مقايسه آن با لكه ­گذاري نقطه­اي به ترتيب حساسيت و ويژگي 100٪ و 91/9٪ شد. نتايج نشان داد روش لكه­ گذاري نقطه‌اي به‌ دليل حساسيت بالا، سرعت، سهولت قرائت و قابليت كاربردي صحرايي آن، در صورت تاييد مراجع مسئول تشخيص در عفونت با بورخولدريا مالئي مي‌تواند استفاده شود.

Glanders is one of the most important zoonotic diseases that caused by Burkholderia mallei. Considering that Iran as the major center for glanders and risks of transmission of it, quick detection is very important. Therefore, the aim of this study is designing of Dot-Elisa system. So, 40 serum samples were collected from different provinces, along with antigen sample of Burkholderia mallei as positive control and healthy horses’ serum (negative control) was used. The optimum concentrations of antigen-antibody were determined by checkerboard titration using glanders positive and negative horse sera. After designing the dot-blot test, an antigen was coated into the nitrocellulose membrane wells and stopped by blocking solution and the suspicious equine serum was poured into the wells along with positive and negative control. In the following conjugated antibody was added on it, finally substrate was added to the wells and reaction was read as color signal. In this study, out of 40 samples, 6 positive cases were positive. Considering mallein test as a standard test and comparing with DotElisa, the sensitivity and specificity were 100% and 91.9% respectively. The results showed that dot-blot test was successful for detection of Glanders due to its high sensitivity, speed, readability and field applicability.