بيان پروتئين هماگلوتينين ويروس آنفلوانزاي فوق حاد پرندگان H5N1 در سلول Sf9 حشره اي توسط يك سيستم غير وابسته به باكلوويروس

Highly Pathogenic Avian Influenza Virus H5N1 Hemagglutinin expressed in Sf9 Insect cells with a Baculovirus Free System

آنفلوانزاي فوق حاد پرندگان بعنوان بيماري جدي عفوني، توسط يك RNA ويروس سنس منفي متعلق به جنس آنفلوانزا و خانواده اورتوميكسوويريده ايجاد مي شود. ويروس هاي نوع A بر اساس آنتي ژنهاي گليكوپروتئيني سطح آنها شامل هماگلوتينين (HA) و نورامينيداز (NA) به زير گروه هايي طبقه بندي مي شوند. ويروس آنفلوانزاي پرندگانH5N1 با حدت بالا (HPAI)، از طريق مرغ هاي خانگي و پرندگان وحشي در بيش از 60 كشور منتشر شده است. در اين مقاله به نحوه بيان هماگلوتنين H5 در سلولهاي Sf9 حشره اي پرداخته شده است كه متعلق به ويروس A/chicken/Iran/53-3/2008(H5N1) مي باشد. توالي نوكلئوتيدي هماگلوتينين، از سويه ايراني اين ويروس كه متعل به clade 2.2 است، از بانك ژني استخراج شده و پس از بهينه سازي كدون ها براي بيان در سيستم سلول حشره، توسط شركت GenScript سنتز شد. اين توالي در پلاسميد pIEx-3 كه حاوي توالي پپتيد ترشحي AKH و 6xHis-Tag مي باشد، داخل شد. پروتئين هماگلوتينين در سلول Sf9 حشره اي، بيان شده و H5 ترشحي با وزن مولكولي 95 كيلودالتون تخليص گرديد. با استفاده از اين سيستم بياني غير وابسته به باكلوويروس، H5 نوتركيب، در مطالعات بعدي مربوط به واكسن هاي مبتني بر پروتئين، انتخاب داروها و ساخت كيت تشخيص آنفلوانزاي فوق حاد پرندگان، قابل استفاده مي باشد.

Highly Pathogenic Avian influenza (AI) is a serious infectious disease caused by negative sense single stranded RNA viruses that belong to the genus Alphainfluenzavirus in the family Orthomyxoviridae. The type A viruses are classified into subtypes based on their surface glycoprotein antigens including hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA). Highly pathogenic avian influenza (HPAI) virus of the H5N1 subtype has spread through domestic poultry or wild birds in more than 60 countries. This article reports heterologous expression in Sf9 insect cells of H5-Hemagglutinin derived from avian influenza virus A/chicken/Iran/53-3/2008(H5N1). The HA nucleotide sequence of an Iranian strain of H5N1 virus from clade 2.2, (A/chicken/Iran/53- 3/2008), was obtained from Genbank. The nucleotide sequence data was codon optimized for insect cells. Using pIEx-3 vector a molecular construct, encoding a secretion signal peptide of adipokinetic hormone (AKH) and 6xHis-Tag coding sequence, upstream of the cloning site for expressing fusion recombinant HA protein with N-terminal tags, were designed and ordered for synthesis by GenScript, Recombinant H5-Hemagglutinin was expressed in Sf9 insect cells as a 95kDa secreted protein. This insect-based Baculovirus-Free heterologous expression system provided functionally recombinant H5-Hemagglutinin that should be useful in anti-influenza drug screening, detection, and diagnostic tests and also as a potential protein-based vaccine.