بررسي خصوصات ژنوتيپي آنزيم هيستاميناز گياه خلر (lathyrus sativus) در راستاي اهداف درماني و تشخيصي

Genotype characterization of histaminase enzyme from grass pea (Lathyrus sativus) for treatment and diagnosis purposes

هيستامين يك آمين زيستي است كه در بيماري‌هاي مختلف مانند رينيت آلرژيك، التهاب ملتحمه، كهير و درماتيت آتوپيك و هم چنين در ايجاد بيماري‌هاي آنافيلاكسي قلبي و آسم‌هاي آلرژيك نقش دارد. گياهان دارويي از دير باز در درمان بيماري‌هاي مختلف استفاده ‌شده‌ اند. به دليل كاربردهاي وسيع آنزيم هيستاميناز در درمان بيماري‌ هاي با منشا هيستامين در انسان و دام، در اين مطالعه شناسايي و هم سان سازي ژن آنزيم هيستاميناز (dao) از گياه خُلر (lathyrus sativus) بومي صورت گرفت. به اين منظور استخراج mrna از جوانه خلر بومي استان فارس و به دنبال آن سنتز cdna به منظور تكثير ژن هيستاميناز با پرايمرهاي طراحي شده انجام شد، سپس همسان سازي ژن پس از برش آنزيمي در ژن و وكتور pqe80l انجام گرديد، در نهايت انتقال وكتور نوتركيب به باكتري escherichia coli سويه‌ xl1blue صورت گرفت. صحت كلونينگ نيز با هضم آنزيمي و توالي يابي تاييد شد. پس از توالي يابي نوكلئوتيدي، ترادف mrna ژن مربوط به طول 1995جفت باز در بانك ژن امريكا به شماره دسترسي kr063661 ثبت گرديد، توالي پروتئيني آن نيز در بانك ژن به شماره ale71304 ثبت شد. ارزيابي ساختار سه بعدي آنزيم هيستاميناز بومي و مطالعه فيلوژنتيك آن نيز براساس ترادف‌هاي شناخته شده در اين مطالعه انجام گرفت كه نشان‌ دهنده بيش ترين شباهت ژنتيكي (94 %) و پروتئيني (% 96) به گونه‌ نخود (pisium sativum) است. پلاسميد نوتركيب توليد شده در آينده مي‌ تواند در سيستم‌هاي بياني استفاده شود و منجر به توليد انبوه آنزيم براي استفاده از خصوصيات درماني اين آنزيم منحصر به فرد گردد.

Histamine is a biological amine that plays a role in various diseases such as allergic rhinitis, conjunctivitis, urticaria and atopic dermatitis, as well as in the development of anaphylaxis and allergic asthma. Medicinal plants have long been used in the treatment of different diseases. Due to the extensive use of this enzyme in the treatment of histamine-induced diseases in humans and animals, this study aimed at cloning and characterization of the DAO gene in this Iranian native grass pea plant (Lathyrus sativus). For this purpose, the extraction of mRNA from native seedling of Fars province done and followed by cDNA synthesis for the amplification of the histaminease gene using primers designed. Then, the cloning of the gene performed after double digestion of the gene and the pQE-80L vector. Finally, the recombinant vector transferred to Escherichia colistrain XL1-Blue. Cloning accuracy was confirmed by enzymatic digestion and sequencing. After nucleotide sequencing, the corresponding mRNA gene with 1995 bp length was deposited in GenBank database under accession number KR063661. Also, its protein sequence was registered in the GenBank under accession number ALE71304. The evaluation of the three-dimensional structure of the native histaminase enzyme and its phylogenetic study was performed based on the well-known sequences in this study Which showed the highest genetic (94%) and protein (96%) similarity to chickpea (Pisium sativum). The recombinant plasmid was produced in the future can be used in expression systems to produce mass enzymes for the therapeutic properties of this unique enzyme.