توليد لنتي‌ ويروس اينتگراز منفي به منظور بيان گذراي پروتئين مورد نظر و كاهش اثرات جانبي ويروس در ژن درماني

مقدمه: وكتورهاي لنتي ويروسي ابزارهاي مؤثري براي ژن درماني مي‌باشند؛ ولي ورود پرو-ويروس به ژنوم، استفاده از آن‌ها را خطرناك كرده است. بنابراين، وكتورهاي لنتي ويروسي ناقص از نظر اينتگراز بي‌خطرتر را مي‌توان با ايجاد موتاسيون در ژن اينتگراز توليد نمود تا به طور ويژه، از ورود پرو-ويروس به ژنوم جلوگيري نمايد. در اين مطالعه، يك وكتور لنتي ويروسي ناقص از نظر ژن اينتگراز نسل دوم، طراحي و ساخته شد؛ اين محصول، براي هدف قرار دادن ژن به طور گذرا با وكتور ويروسي مناسب مي‌باشد. روش‌ها: با به كار بردن استراتژي جهش زايي هدفمند با تكنيك Overlap polymerase chain reaction، يك جهش بدمعني (D64V) در ناحيه‌ي كاتاليتيك ژن اينتگراز در پلاسميد بسته‌بندي psPAX2 ايجاد و با تكنيك توالي‌يابي، تأييد گرديد. لاين سلولي HEK293T با سه پلاسميد psPAX2 (طبيعي و ناقص از نظر اينتگراز)، pLOX (پلاسميد انتقال) و PMD2G (پلاسميد انولپ) ترانسفكت گرديد. سپس، ويروس برداشت و در لاين سلولي HEK293T ترانسداكت گرديد. ميزان بيان ژن گزارشگر Green fluorescent protein (GFP)، به مدت ده روز، در سلول‌هاي ترانسداكت شده با ويروس طبيعي و ناقص با ميكروسكوپ فلورسنت بررسي گرديد. يافته‌ها: ما كاهش تعداد سلول‌هاي بيان كننده‌ي ژن GFP را با شيب ملايم در سلول‌هاي ترانسداكت شده با ويروس طبيعي در طول دوره مشاهده كرديم. در مقابل، در مورد ويروس‌هاي ناقص، كاهش شديدي در تعداد سلول‌هاي بيان كننده‌ي ژن GFP داشتيم. نتيجه‌گيري: در اين مطالعه، psPAX2 ناقص از نظر اينتگراز ساخته و تأييد گرديد. نتايج نشان داد كه وكتورهاي لنتي ويروسي ناقص از نظر اينتگراز مي‌تواند ابزار مفيدي براي بيان ژن به صورت گذرا و كارامد باشد. به اين ترتيب، معايب هدف قرار دادن ژن با ويروس طبيعي حذف مي‌گردد.