بيان پروانسولين انساني در گياه با استفاده از ناقل pVUT (Plasmid Viral University of Tehran)

مقدمه: انسولين هورمون پروتئيني است كه توسط سلول‌هاي بتاي پانكراس ترشح مي‌شود. به علت معايب توليد پروتئين‌هاي نوتركيب در ميكروارگانيسم‌ها، هزينه به نسبت بالا، امكان آلودگي با پروتئين‌هاي سمي و مراحل هزينه‌بر خالص‌سازي، توليد پروتئين‌هاي نوتركيب در گياهان امري قابل بررسي است. توسعه‌ي سيستم بيان گذرا بر پايه‌ي نوع حذف شده‌ي RNA-2 ويروس موزائيك لوبيا چشم بلبلي (Cowpea Mosaic Virus-Hyper Translatable يا CPMV-HT)، امكان توليد سريع و سطوح بالاي پروتئين‌ها را بدون استفاده از همانندسازي ويروسي فراهم كرده است. روش‌ها: در اين مطالعه، سازه‌هاي pBI121-Proinsulin-Zera (pBI-ProZ) در بر دارنده‌ي توالي ژن پروانسولين انساني و Zera (دومين انتهاي N غني از پرولين گاما- زئين ذرت) و pCAMBIA1304-Proinsulin-Extensin (pCAMBIA-ProE) در بر دارنده‌ي سيستم بياني CPMV-HT، به منظور بهبود ترجمه‌ي ژن پروانسولين انساني و توالي سيگنال پپتيد اكستنسين هويج ساخته شد. اين دو سازه، به واسطه‌ي باكتري Agrobacterium tumefaciens pv. C58، به صورت بيان گذرا به گياهان كاهو و يونجه انتقال داده شدند. تحليل آماري اين پژوهش بر پايه‌ي آزمايش فاكتوريل، در قالب طرح به‌كلي تصادفي بر روي غلظت پروانسولين توليدي در هر گرم برگ تراريخت صورت گرفت. بيان ژن پروانسولين در بافت گياهي تراريخت در سطح رونويسي، با استفاده از واكنش Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) و در سطح ترجمه، با استفاده از آزمون لكه‌گذاري نقطه‌اي و Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) مورد تأييد قرار گرفت. يافته‌ها: ميزان پروانسولين فعال توليدي با سازه‌هاي pCAMBIA-ProE و pBI-ProZ، در برگ‌هاي يونجه تراريخت، به ترتيب 6/82 و 4/32 نانوگرم در هر گرم برگ تر و در برگ‌هاي كاهوي تراريخت، به ترتيب 6/6 و 3/8 نانوگرم در هر گرم برگ تر بود. نتيجه‌گيري: طبق نتايج به دست آمده از اين تحقيق، ميزان بيان پروتئين پروانسولين در سازه‌ي pCAMBIA-ProE در بر دارنده‌ي خصوصيات سيستم بياني CPMV-HT، بيشتر از سازه‌ي pBI-ProZ بود.