بهينه‌سازي توليد يك آنتي‌بادي با اختصاصيت دوگانه عليه گيرنده‌ي لپتين و CD4 انساني و بررسي خواص آن

مقدمه: نقص در لپتين و يا گيرنده ي آن، اثر محافظتي در ابتلا به بيماري هاي خودايمن دارد؛ اما از آن جايي كه لپتين روي سلول هاي بسياري داراي گيرنده است، مسدود كردن همه ي آن ها عواقبي را به دنبال خواهد داشت. بنا بر اين، آنتاگونيست لپتين در فرم قطعه اي آنتي بادي با ويژگي دوگانه (taFv) عليه CD4 و گيرنده ي لپتين ObR، از طريق هدف قرار دادن ObR فقط بر روي سلول هاي T، داراي پتانسيل درماني براي چنين بيماري هايي است. اين پژوهش با هدف افزايش بيان taFv مذكور انجام شد. روش ها: قطعه ي ژني taFv، از وكتور pAB1 به وكتور pET32a ساب كلون شد. واكنش (PCR (Polymerase chain reaction به منظور تاييد ورود قطعه انجام گرفت. تاييد توليد پروتئين با روش هاي (Dot blot، SDS PAGE (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis و Western blot انجام گرفت. تاثير شرايط مختلف محيطي شامل محيط كشت، سويه ي باكتريايي، دما و غلظت (IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside بر روي بيان از طريق ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) آزمايش شد. در نهايت، خاصيت زيستي پروتئين توليد شده به روش فلوسايتومتري بررسي گرديد. يافته ها: نتايج PCR، حضور taFv را در پلاسميدهاي ساب كلون شده تاييد كرد. آزمايش هاي Dot blot، به وضوح افزايش بيان پروتئين را در مقايسه با وكتور قبلي و آزمايش ELISA، محيط سوربيتول دار، دماي C° 18، سويه ي(E. coli BL21 (Escherichia coli و غلظت IPTG mM 0/05 را مناسب تر از ساير سطوح براي بيان پروتئين نشان داد. فلوسايتومتري قابليت اتصال taFv توليد شده به حدود 20 درصد از لنفوسيت ها را نشان داد.نتيجه گيري: امكان توليد taFv به صورت نوتركيب با قابليت اتصال به مولكول CD4 روي لنفوسيت هاي انسان وجود دارد. همچنين، با بهينه سازي شرايط توليد، امكان افزايش توليد آن فراهم مي شود.