ارزيابي پايدارترين ژن‌هاي مرجع در بافت بيضه‌ي مردان آزواسپرم

قدمه: واكنش PCR كمي در زمان واقعي (Real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction يا qRT-PCR)، يك روش سريع، حساس و قابل اعتماد براي مقايسه‌ي بيان ژن‌ها مي‌باشد كه مستعد خطاهاي تكنيكي فراواني است. همچنين، استفاده از ژن‌هاي مرجع (خانه‌گردان) تاريخي، هميشه و در همه‌ي بافت‌ها مناسب نمي‌باشد. در اين مطالعه، به بررسي و انتخاب ژن(هاي) مرجع مناسب در بافت بيضه پرداخته شد تا بتوان از اين ژن(هاي) مناسب براي انجام واكنش qRT-PCR استفاده كرد. روش‌ها: نمونه‌ي بافت بيضه از 15 مرد آزواسپرم غير انسدادي (NOA يا Non-obstructive azoospermia) به عنوان گروه مورد و 15 مرد آزواسپرم انسدادي (OA يا Obstructive azoospermia) به عنوان گروه شاهد گرفته شد. با استفاده از نرم‌افزار Beacon designer 8.1 پرايمرهاي مناسب براي چهار ژن مرجع Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)، Ribosomal protein L37 (RPL37)، Ring finger protein 1 (RING1) و Eukaryotic translation elongation factor 2 (eEF2) طراحي شد. بهينه‌سازي‌هاي قبل از انجام qRT-PCR، شامل كنترل مقدار RNA براي سنتز Complementary DNA (cDNA) و تعيين غلظت مناسب پرايمرها انجام شد. منحني ذوب رسم گرديد و مقادير Quantitation cycle (Cq) استخراج شد. آناليز ميانگين Cq در دو گروه شاهد و مورد با استفاده از نرم‌افزار BestKeeper نسخه‌ي 1 انجام شد و ژن‌هاي مرجع مناسب انتخاب گرديد. يافته‌ها: مقايسه‌ي ميانگين Cq بين دو گروه NOA و OA حاكي از آن بود كه دو ژن RPL37 و GAPDH به ترتيب با انحراف معيار 1/39 و 1/67 كمترين تغييرات را در بين چهار ژن مرجع كانديدا نشان داد. بنا بر اين، دو ژن RPL37 و GAPDH، به ترتيب با مقادير r برابر با 0/959 و 0/927، به عنوان مناسب‌ترين ژن‌هاي مرجع در بافت بيضه انتخاب شد. نتيجه‌گيري: دو ژن RPL37 و GAPDH به ترتيب، مناسب‌ترين ژن‌هاي مرجع در بافت بيضه هستند و براي مطالعه‌ي بيان ژن‌ها با استفاده از روش qRT-PCR مناسب مي‌باشند