طراحي كيت تشخيصي كلاميديا تراكوماتيس در زنان علامت‌دار به روش Real time PCR

زمينه و هدف: كلاميديا تراكوماتيس يكي از شايع‌ترين علل عفونت‌هاي منتقلِ از راه جنسي در سراسر جهان است. غربالگري زنان براي عفونت‌هاي كلاميديايي در كشورهاي درحال‌توسعه به دليل مؤثر نبودن روش‌هاي تشخيصي در دسترس، بسيار موردتوجه قرارگرفته است. هدف از انجام اين تحقيق دستيابي به روشي است كه تشخيص عفونت كلاميديا تراكوماتيس را در زنان داراي علامت سهولت ببخشد. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تعداد 50 نمونه باليني (واژينال) از زنان علامت‌دار جمع‌آوري شد. پس از استخراج DNA، توالي ژن OMP1 به‌عنوان ژن منتخب از بانك ژن استخراج گرديد. سپس، با استفاده از نرم‌افزار Mega6 پرايمرهاي اختصاصي طراحي گشت. با نمونه‌هاي DNA استخراج‌شده PCR گذاشته شد و صحت پرايمرهاي طراحي‌شده تائيد شد. به‌منظور ساخت كنترل مثبت محصول PCR در وكتور، كلون شد. جهت تعيين حساسيت Real time PCR، رقيق‌سازي DNA از كنترل مثبت صورت گرفت و با رقت‌هاي مختلف Real time PCR گذاشته شد و همچنين جهت تعيين اختصاصيت Realtime PCR، DNA باكتري‌هاي ناحيه واژن استخراج و Realtime PCR انجام شد. نتايج: در اين تحقيق توانستيم به‌وسيله تكنيك مولكولي پيشرفته Realtime PCR كيتي طراحي كنيم كه داراي 10 پيكوگرم حساسيت و 100 درصد اختصاصيت در تشخيص عفونت كلاميديايي در زنان علامت‌دار است. نتيجه‌گيري: با پرايمرهاي طراحي‌شده و روش ريل تايم مي‌توان تشخيص 100 درصد نسبت به عفونت‌هاي كلاميديا داشت.