طراحي و كلون كردن microRNA-148b در شاتل وكتور لنتي ويروسي

مقدمه: ريزRNAها (miRNAs)، RNAهاي غير كد كننده‌ي كوچكي هستند كه بيان ژن را از طريق اتصال به mRNA هدف تنظيم مي‌نمايند. از آن‌جايي كه اين مولكول‌ها در تكثير و تمايز سلولي نقش مهمي دارند، مي‌توان از آن‌ها در پزشكي ترميمي استفاده كرد. از ميان حاملين مختلفي كه براي رها‌سازي اين اليگونوكلئوتيدها وجود دارد، سيستم لنتي ويروسي حامل مناسبي به نظر مي‌رسد. از طرف ديگر، مشخص شده است كه miR-148b در استئوژنز نقش دارد. بدين منظور، در مطالعه حاضر طراحي و كلون كردن microRNA-148b در شاتل وكتور لنتي ويروسي مورد بررسي قرار گرفت. روش‌ها: ابتدا پرايمرهاي رشته‌هاي p3 و p5 microRNA-148b طراحي گرديد و پس از هيبريداسيون، داخل پلاسميد شاتل لنتي ويروسي كلون شد. سپس ورود صحيح قطعه‌ها با استفاده از هضم آنزيمي و توالي‌يابي مورد بررسي قرار گرفت. در ادامه، پس از توليد ذرات لنتي ويروسي مربوط، از آن‌ها براي ترانس‌داكشن سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي استفاده گرديد. يافته‌ها: miR-148b-3p/-5p طراحي شده با موفقيت داخل شاتل لنتي ويروسي كلون گرديد. يافته‌هاي حاصل از هضم آنزيمي و توالي‌يابي، مؤيد ورود موفقيت‌آميز رشته‌هاي مورد نظر داخل پلاسميد لنتي ويروسي بود. بيان بالاي Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) نشان دهنده‌ي كارايي بالاي ترانس‌فكشن و ترانس‌داكشن بود. نتيجه‌گيري: در مطالعه‌ي حاضر دو نوع ويروس حامل miR-148b3p و miR-148b5p توليد گرديد كه مي‌توانند جهت بررسي فرايند استئوژنز مورد بررسي قرار گيرند.