آناليز منحني ذوب با شفافيت بالا(HRM) به منظور شناسايي سريع و دقيق باكتري سالمونلا بااستفاده از ژن invA

High resolution melting (HRM) curve analysis for rapidly and accurate determination of Salmonella spp. with invA gene

سابقه و هدف: سالمونلوز يكي از بيماري هاي عفوني و مشترك بين انسان و حيوانات است كه به وسيله سويه هاي مختلف سالمونلا ايجاد مي گردد. پيشرفت در روش هاي تشخيص مولكولي، شناسايي پاتوژن هاي غذايي را دقيق تر و راحت كرده است. هدف از اين پژوهش استفاده از روش HRM به منظور شناسايي سريع و دقيق باكتري سالمونلا با استفاده از ژن inv A مي باشد. مواد و روش ها: در اين تحقيق شناسايي باكتري سالمونلا با واكنش زنجيره اي پلي مراز با روش منحني ذوب با شفافيت بالا ( PCR-HRM) به وسيله توالي ژن invA، به عنوان يك نشانگرانجام شد.در مجموع تعداد 9 سويه رفرانس سالمونلا با استفاده از يك جفت آغازگراختصاصي ژن invA براي تشخيص باكتري سالمونلا استفاده شدند. يافته ها: قطعات موردانتظار 284 جفت بازي پس از تكثير ژنinvA توسط PCR به دست آمد. تمام نمونه هاي مورد آزمون قادر به توليد پيك منحني ذوب اختصاصي سالمونلا با شفافيت بالا در بازه دمايي 87/8 تا 87/9 درجه سلسيوس بودند. نتيجه گيري:نتايج نشان داد كه روش شفافيت منحني ذوب با استفاده از آغازگر هاي اختصاصي ژن invA مي تواند به عنوان يك روش دقيق و مطمئن به منظور تعيين جنس هاي سالمونلا مورد استفاده قرار گيرد.

Background & Objectives: Salmonellosis is an infectious and common disease between humans and animals that is caused by different strains of Salmonella. Progress in molecular diagnostic methods, has led to accurate and easy detection and characterization of food microbial agent. The purpose of this research was to use HRM technique to access more accurate and rapid diagnosis of Salmonella bacteria by means of invA gene. Material & Methods: In this study, diagnosis of Salmonella was done by polymerase chain reaction and high resolution melting curve ( PCR-HRM) using the sequence on invasion A gene (invA) as a marker. In total 9 Salmonella reference strains using a specific primer pair of genes invA were used to detect Salmonella. Results: The expected size of PCR amplified fragments of invA gene was determined as 284bp. All tested strains were able to show a Salmonella specific melting curve with high resolution at thermal interval of 87.8-87.9°C. Conclusion: The results showed that HRM using specific primers of invA gene can be used as an accurate and reliable technique for diagnosis Genus of Salmonella.