بررسي حساسيت و اختصاصيت روش سروتايپينگ در مقايسه با روش مولكولي در شناسايي انتروپاتوژنيك اي. كلاي جدا شده از كودكان مبتلا به اسهال

Evaluating of Serological and Molecular Methods in Detection of Entropathogenic Escherichia Coli Isolated from Children with Diarrhea

سابقه و هدف انتروپاتوژنيك اشرشيا كلاي به عنوان يكي از مهمترين عوامل بيماري زاي عفوني كودكان و عامل اسهال پايدار و مزمن در جهان است. اين ارگانيسم داراي سروتايپ هاي مشخصي است كه در كودكان ايجاد اسهال ميكند. ژني كه براي شناسايي اين باكتري استفاده مي شود eae نام دارد. در آزمايشگاه هاي باليني ايران براي تشخيص اين پاتوتايپ از روش سروتايپينگ استفاده مي شود ولي نشان داده شده است كه مي تواند منجر به نتايج مثبت كاذب شود. اين مطالعه با هدف مقايسه روش سروگروپينگ و روش مولكولي براي شناسايي پاتوتايپ EPEC اي.كلاي انجام شد. روش كار در اين مطالعه تعداد 885 ايزوله اي. كلاي كه از تعداد 1387 نمونه كودكان مبتلا به اسهال جمع آوري شده بود بررسي شد. نمونه ها از لحاظ وجود سروگروه هاي EPEC توسط آزمون هاي سرولوژي بررسي شدند و شناسايي مولكولي انتروپاتوژنيك اي. كلاي با استفاده از تشخيص ژن eae به وسيله PCR و پرايمرهاي اختصاصي آن انجام شد. يافته ها از ميان 885 ايزوله اي.كلاي تعداد 35 ايزوله( 95 / 3 %)توسط يكي از آنتي سرم هاي گروه O مثبت شدند و به عنوان گونه مشكوك به EPEC در نظر گرفته شدند از اين تعداد، تنها 10 مورد( 13 / 1 %)حاوي ژن eae بودند و اين در حالي است كه با استفاده از روش PCR 68 ايزوله( 68 / 7 %)از 885 اي. كلاي حاوي ژن eae بودند و EPEC ناميده شدند. با توجه به اين اطلاعات، حساسيت و ويژگي براي روش سروتايپ به ترتيب 7 / 14 % و 9 / 96 % بدست آمد. نتيجه گيري روش سروتايپينگ كه براي تشخيص EPEC در آزمايشگاه ها به طور روتين استفاده مي شود داراي نتايج مثبت و منفي كاذب فراواني است و بايد ترتيبي اتخاذ شود تا روش هاي مولكولي مورد اعتماد جايگزين اين روش شود.

Background an‎d Objective Entropathogenic Escherichia coli (EPEC) are one of the major factors in children infection and continues diarrhea in the world. EPEC is one of the E.coli pathotypes with specific serogroups which can cause diarrhea in the children. The eae gene can be used for the molecular detection of these bacteria. In Iran clinical laboratories still use serogrouping for detection of EPEC which is suggested to produce false positive results.The aim of this study was to compare serogrouping and molecular methods for detection of EPEC and calculate sensitivity and specificity of serogrouping assay. Materials an‎d Methods A total of 885 E.coli were examined in this study and for each E.coli isolate serogrouping and molecular detection of eae gene with specific primer sets was conducted.The O serotyping method was used to identify the isolates belonging to commercially defined O serogroups. Isolates which could agglutinate with one of the specific commercial pathogenic O antisera were considered as suspected EPEC and subjected to molecular detection with primers specific for eae gene. Results Thirty five E.coli isolates belonging to one of the O serogroups were identified and characterized as suspected EPEC. Of these just 10 isolates harbor eae gene while 68 isolate of all 885 E.coli isolates carried eae gene and identified as EPEC. Conclusion The result of this study strongly confirm that serogrouping which is a usual method for detection of EPEC in clinical laboratory in Iran leads to false positive and negative results and should be replaced with more reliable molecular methods.