اثر فراكشن بدست آمده از زهر مار كبري ايراني(Naja naja oxiana) بر سلولهاي سرطان سينه رده1T4

Anti-cancer Activity of Fractions Derived from Venom of Iranian Cobra Snake (Najanajaoxiana) on Breast Cancer Cell Line 4T1

سرطان پستان علت اصلي مرگ مرتبط با سرطان در زنان است. بسياري از بيوتوكسين ها به عنوان يك منبع بيولوژيكي مفيد داراي تركيبات فعال دارويي و اثرات ضد توموري هستند. زهر مار مخلوطي پيچيده از مواد دارويي فعال است. ونوم مار سبب مهار تكثير سلولي و آپوپتوز در سلول هاي سرطاني مي شود. مطالعه حاضر با هدف تعيين اثر ضد سرطاني و سايتوتوكسيك فراكشن هاي بدست آمده از ونوم مار كبري Naja naja oxiana بر روي سلول هاي سرطان سينه انجام شد. روش كار: سلول سرطان سينه 4T1 در محيط RPMI با 10٪ سرم جنين گاوي كشت داده شدند. ونوم مار كبري ايراني با استفاده از روش كروماتوگرافي ژل فيلتراسيون و تعويض يوني تخليص شد. غلظت فراكشن ها تعيين و محدوده وزن مولكولي آنها با روش -SDS PAGE بررسي گرديد.اثر ضد چسبندگي و سميت سلولي فراكشن فعال بر روي سلول هاي كشت داده شده به ترتيب با استفاده از روش رنگ آميزي با تريپان بلو و MTT اندازه گيري شد. يافته ها: از كروماتوگرافي ژل فيلتراسيون تعدادفراكشن جداسازي شد. فراكشن F3 حاصل از كروماتوگرافي ژل فيلتراسيون، داراي وزن مولكولي حدود 50 كيلودالتون بود كه معادل وزن مولكولي پروتئين هاي ديس اينتگريني مي باشد. لذا فراكشن F3 جهت تخليص بيشتر بوسيله ي كروماتوگرافي تعويض يوني انتخاب شده و 4 فراكشن جداسازي گرديد. فراكشن F2 با وزن مولكولي kDa 47 ، به عنوان فراكشن فعال انتخاب شد و نتايج حاصل از تست MTT نشان داد كه فراكشن فعال بدست آمده از كروماتوگرافي تعويض يوني بر روي سلول سرطاني 4T1 در مقدار 3/. μg، 45 درصد سميت داشته و بر روي سلول نرمال HEK293 ، 8 درصد اثر سايتوتوكسيك داشت. نتيجه گيري: فراكشن فعال ونوم مار كبري ايراني داراي اثرات سايتوتوكسيك بر روي سلول هاي سرطان سينه مي باشد و گزينه ي مناسبي جهت تخليص كامل تر در انجام مطالعات داروهاي ضد سرطاني با منشا طبيعي مي باشد.

Background an‎d Objective Breast cancer is the leading cause of cancer-related death in women. Many biotoxins like snake venom as a source of useful biologically active compounds are potential anti-cancer agents. Venom is a complex mixture of active pharmaceutical ingredients. The purpose of this study was investigation of anticancer activity of the fractions obtained from the venom of Iranian cobra,Naja naja oxiana, by gelfiltration and anion exchange chromatography on breast cancer cell line. Methods Breast cancer cell line (4T1) was cultured in RPMI with 10% fetal bovine serum. Iranian cobra venom purified by gel filtration and anion exchange chromatography. The concentrations of these fractions were determined by BCA method and their molecular weight measured by SDS-PAGE. Cytotoxicity of the fractions on cancer and normal cell lines was evaluated with MTT assay. Result Based on the results obtained from gel filtration chromatography, 6 fractions were separated. Fraction F3 had a protein with molecular weight of 50 kDa that is equivalent to the molecular weight of disinterring. Therefore, fraction F3 selected for further purification by anion exchange chromatography. Four fractions were isolated by anion exchange chromatography. Fraction F2 had anticancer activity by MTT and Anti-adhesion assays and determined as active anti-cancer fraction. Molecular weight of fraction F2 was 47 kDa. The results of MTT assay showed 45 and 8 percent cytotoxicity on 4T1 and normal cell lines(HEK293) respectively. Conclusion The active fraction of Iranian Cobra venom had cytotoxic effects on breast cancer cells with very low toxicity on normal cells. According to results, this fraction had anti-adhesion and cytotoxic activity can be a good candidate for more purification and characterization.