جداسازي و شناسايي مولكولي اكتينوباكترهاي كمياب مولد آنتي بيوتيك عليه مخمر Candida albicans

Isolation and Molecular Identification of Antifungal Producing Rare-actinobacteria against Candida albicans

سابقه و هدف: با شيوع عفونت هاي قارچي و به دنبال آن افزايش استفاده از داروهاي ضدقارچي افزايش قابل ملاحظه مقاومت گونه هاي Candidaسبت به تركيبات ضدقارچي ديده مي شود. اكتينوميست ها همواره به عنوان يك منبع اصلي توليد كننده آنتي بيوتيك هاي جديد و متابوليت هاي ثانويه متنوع، مورد توجه بوده اند. اما در دو دهه گذشته ميزان در كشف متابوليت هاي جديد جداشده از اكتينومايست هاي بارز (اعضاي جنس Streptomyces) كاهش يافته است. بنابراين اكتينوميست هاي كمياب به عنوان منابع جديد متابوليت فعال زيستي از محيط مورد توجه قرار گرفته اند. هدف اين پژوهش جداسازي اكتينوميست هاي نادر توليد كننده تركيبات ضدقارچي از خاك هاي ايران بوده است روش كار: نمونه هاي خاك جمع آوري شده از محيط هاي مختلف پس از تيمار و رقيق سازي در محيط ISP2 كشت داده شدند. جدايه ها روش هاي مورفولوژيك و بررسي ميكروسكوپي كلني ها و تست DAP شناسايي و جداسازي شدند. در مرحله بعد اثر مايع تخمير جدايه ها عليه مخمر Candida albicans با استفاده از روش چاهك در پليت بررسي شد. يافته ها: از بين 50 جدايه اكتينوباكتر حاصل، 9 جدايه داراي خاصيت ضد قارچي به دست آمد. نتايج آناليز مولكولي ژن 16S rRNA نشان مي دهد كه اين جدايه ها متعلق به جنس هاي Nocardiopsis Actinomadhutra Nocardia Saccharomnonosporat Streptomyces و Martelella بودند. در بين جدايه هاي به دست آمده سويه UTMC2325 با هاله مهار رشد (34 ميلي متر) بر عليه C. albicans ، با شباهت 98/84%به Nocardia rhamnosiphila بيشترين فعاليت زيستي را داشت. نتيجه گيري: اين پژوهش نشانگر غني بودن خاكهاي ايران از اكتينوميست هاي فعال توليد كننده تركيبات ضد قارچي است.

Background an‎d Objective In last decades, fungal diseases have been treated by using antifungal antibiotics, e.g. azoles, polyenes and candicidines. Also, antifungal resistant Candida was evoluted, too and therefore, it needs to find new antifungal agents. Actinomycetes have been considered as main sources to find new antibiotics and various secondary metabolites during the last six decades. However, frequency of isolation of new metabolites from predominant actinomycetes (members of Streptomyces genus) reduced during two decades and therefore rare-actinomycetes have been used as promising sources to find new matabolites from various environments. In this research, antifungal producing rare-actinomycetes have been isolated from various soils of Iran. Material and Methods The soil samples were dried and appropriate dilutions were cultured on ISP2 agar. The morphology of colonies, microscopy and diaminopimelic acid test were examined on the isolates. Antifungal effect of the fermentation broth of the isolates was done against Candida albicans using well diffusion assay. Results The results showed that among 50 actinomycetes isolates, 9 isolates have anti-Candida activity. The results of 16S rRNA gene analysis were revealed that the potent strains were belonged to Nocardia, Actinomadura, Streptomyces, Nocardiopsis, Martelella and Saccharomonospora. Conclusion Among the isolates, the strain UTMC 2325 had highest activity (34 mm) and had 98.84% similarity in 16S rRNA gene analysis to Nocardia rhamnosiphila. This research showed that the soils of Iran can be considered as promising sources to find antifungal producing actinomycetes.