طراحي، توليد و ارزيابي وايروزوم از ويروس آنفلوانزا ساب تايپ H1N1

زمينه: در دو دهه گذشته، اولين نسل از وايروزوم‌هاي آنفلوانزا گسترش پيدا كرد. وايروزوم‌هاي آنفلوانزا به‌دليل كاربرد آن‌ها در زمينه‌هاي مختلف پزشكي به‌عنوان ابزاري نوين در برنامه‌هاي ساخت واكسن و ايمونوتراپي به حساب مي‌آيند. هدف از مطالعه حاضر، ساخت وايروزوم كاتيونيك مشتق شده از ويروس آنفلوانزا با استفاده از دترجنت با قابليت دياليز (DCPC) و ليپيد كاتيونيك (DOTAP) در شرايط آزمايشگاهي مي­باشد. مواد و روش‌ها: ويروس آنفلوانزا سويه (H1N1)A/Puerto Rico/8/34 در رده سلولي اپيتليال كليه سگ سانان تكثير داده شد. پوشش ويروس آنفلوانزا با استفاده از DCPC به‌عنوان يك دترجنت حل گرديد و با استفاده از دياليز، اين دترجنت حذف شده و با افزودن ليپيد كاتيونيك DOTAP، وايروزوم كاتيونيك سنتز شد. ميزان سميت سلولي وايروزوم سنتز شده با روش MTT مورد ارزيابي قرار گرفت و حضور پروتئين­هاي هماگلوتنين و نورآمينيداز با استفاده SDS-PAGE مورد بررسي قرار گرفت. مورفولوژي وايروزوم ساخته شده از طريق ميكروسكوپ عبوري بررسي شد. يافته‌ها: غلظت نهايي وايروزوم ساخته شده، 1/5 ميلي‌گرم در ميلي‌ليتر بود. با استفاده از SDS-PAGE، حضور پروتئين­هاي هماگلوتينين و نورآمينيداز تأييد شد. همچنين در مقايسه با گروه كنترل، سايتوتوكسيسيته پس از 48 ساعت از تيمار با غلظت‌هاي مختلف وايروزوم كاهش معني‌داري داشت (p<0/05). نتيجه‌گيري: استفاده از دترجنت DCPC و همچنين ليپيد كاتيونيك DOTAP يك روش مؤثر در بازآرايي پوشش ويروس آنفلوانزا بدون ايجاد تغييرات در گليكوپروتئين‌هاي سطحي ويروس مي‌باشد. روش به كار رفته در تحقيق حاضر براي توليد وايروزوم، پتانسيل مناسبي در برنامه­هاي طراحي واكسن آنفلوانزا در آينده خواهد داشت.

Background: The last two decades witnessed the spread of the first generation of influenza viruses. Influenza virosomes are promising tools in vaccine and immunotherapy programs because of their applications in various medical fields. The aim of the present study was to construct cationic virosomes derived from influenza virus using dialyzable detergent (DCPC) and cationic lipid (DOTAP) in vitro. Materials and Methods: Influenza A / Puerto Rico / 34.8 (H1N1) strain was propagated in MDCK cell line. The influenza virus envelope was dissolved using DCPC as a dialyzable detergent, and finally it was removed by dialysis and the cationic virosome was synthesized through adding cationic lipid (DOTAP). Cytotoxicity and presence of HA and NA proteins were evaluated by cell viability assay (MTT assay) and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), respectively. Also, macroscopic and morphology studies of virosomes were performed by transmission electron microscopy (TEM). Results: The final concentration of virosomes was 1.5 mg/ml. The presence of HA and NA proteins was confirmed by SDS-PAGE. Cell survival was significantly decreased after 48 hours of treatment with different concentrations of cationic virosomes (P<0.05). Conclusion: The use of a detergent (DCPC) and also a cationic lipid (DOTAP) is an effective procedure for reconstruction of influenza virus envelope without any alteration in surface glycoproteins (HA, NA). The methoed used in the present study for producing influenza virosome will be a promising candidate for developing influenza vaccines.