بررسي ميزان بيان ژن‌GPR83 سلول‌هاي AGS ترانسفكت شده با وكتور نوتركيب pFLAG-CMV-3-tagD

Evaluation of GPR83 Gene Expression in AGS Cells Transfected with Pflag-CMV-3-TagD Recombinant Vector

سابقه و هدف: عفونت هليكوباكترپيلوري از عوامل اصلي ايجاد­كننده سرطان معده در انسان است. ژن tagD هليكوباكترپيلوري كه كد كننده آنزيم تيول پروكسيداز است، نقش مهمي در كلونيزه ­شدن باكتري در جدار معده انسان ايفا مي­ كند. تحقيقات نشان داده است كه ژن GPR83 در سرطان معده افزايش بيان دارند و هدف از اين تحقيق بررسي ميزان بيان ژن­ GPR83، در ﺳﻠﻮل­ هاي ﺳﺮﻃﺎﻧﻲ آدﻧﻮﻛﺎرﺳﻴﻨﻮﻣﺎي ﻣﻌﺪه (adenocarcinoma gastric cell line يا AGS) ترانسفكت شده با وكتور نوتركيب pFLAG-CMV-3-tagD به ­روش Real Time PCR است. مواد و روش ­ها: سلول­ هاي AGS به كمك محلول ليپوفكتامين و با پلاسميد حامل ژن كد كننده tagD هليكوباكتر پيلوري يا پلاسميد خالي (كنترل)، ترانسفكت شدند. سپس استخراج RNA از سلول­ هاي كشت داده شده انجام شد و سنتز cDNA صورت پذيرفت و سپس بيان يوكاريوتي ژن tagD هليكوباكترپيلوري در سلول­ هاي AGS با روش RT-PCR بررسي شد. ميزان بيان ژن­ هاي GPR83، با روش Real Time PCR ارزيابي گرديد. لازم­به ذكر است كه براي بررسي آپوپتوز از كيت انكسين استفاده شد و در نهايت با استفاده از نرم ­افزار SPSSو آزمون­ هاي آماري t-test Indepent بيان هر يك از ژن ­ها بررسي شد. يافته­ ها: يافته­ هاي به­ دست آمده از آناليز بيان ژن نشان داد كه بيان ژن GPR83 در سلول­ هاي AGS تيمار شده با tagD نسبت­به سلول­ هاي كنترل افزايش بيان داشت اما اين افزايش بيان از لحاظ آماري معني­دار نبود (P= 0.0888). نتيجه­ گيري: به­ طور كلي، داده ­هاي به­ دست آمده از اين تحقيق حاكي از آن بود كه بيان ژن­ GPR83 در سلول­ هاي تحت تيمار با ژن tagD هليكوباكترپيلوري، تغيير مي­ يابد و به­ نظر مي ­رسد كه ژن GPR83 هليكوباكترپيلوري در ايجاد اين تغيير بيان نقش دارد.

Aim and Background Helicobacter pylori infection is a major cause of gastric cancer in humans. The Helicobacter pylori tagD gene, which encodes the thiol peroxidase enzyme, plays an important role in bacterial colonization in the human stomach wall. Research has shown that the GPR83 gene in gastric cancer increases expression, and the aim of this study was to investigate the expression of the GPR83 gene in AGS cells transfected with the recombinant pFLAG-CMV-3-tagD vector by Real Time PCR. Materials and methods AGS cells were transfused using lipofactamine solution and plasmid carrying the tagD gene encoding Helicobacter pylori or empty plasmid (control). RNA extraction was then performed from cultured cells and cDNA synthesis was performed, and then the eukaryotic expression of Helicobacter pylori gene tagD in AGS cells was investigated by RT-PCR method. The expression of GPR83 genes was evaluated by Real Time PCR method. It should be noted that the enoxin kit was used to evaluate apoptosis, and finally the expression of each gene was evaluated using SPSS software and t-test Indepent statistical tests. Results The findings from gene expression analysis showed that the expression of GPR83 gene in AGS cells treated with tagD increased compared to control cells, but this increase in expression was not statistically significant (P = 0.0888). Conclusion Overall, the data obtained from this study showed that GPR83 gene expression is altered in cells treated with the Helicobacter pylori tagD gene and seems to play a role in the expression of Helicobacter pylori.