بررسي تأثير استفاده از محيط كشت حاوي ژل پلاكتي در سلامت سلولي و بيان ژن‌هاي PAX6 و RPE65 در سلول‌هاي رنگ‌دانه دار شبكيه انسان

The effect of platelet gel-containing culture medium on the viability and expression of PAX6 and RPE65 genes in human retinal pigment epithelial cells

مقدمه و هدف: تخريب اپيتليوم رنگ‌دانه دار شبكيه انسان (hRPE) در خلال برخي اختلالات از جمله افزايش سن با تضعيف شديد در عملكرد گيرنده‌‌هاي نوري چشم همراه است. پيوند سلولي و بافتي لايه RPE از گزينه‌هاي درماني است كه در سال‌هاي اخير مورد توجه قرار گرفته است. استفاده از ژل پلاكتي تأثيرات مفيدي بر رشد سلول‌‌هاي مختلف كشت داده شده نشان داده است. اين مطالعه به منظور بررسي تأثير سه غلظت مختلف ژل پلاكتي بر زنده ماندن و بيان ژن‌هاي PAX6 و RPE65 سلول‌هاي اپيتليال رنگي شبكيه انساني كشت شده (hRPE) انجام شد. مواد و روش ها: سلول‌هاي hRPE استخراج شده از چشم انسان در صفحات حاوي ژل پلاكت (PL) با غلظت‌هاي مختلف (10٪،20٪ و30٪) كشت داده شدند. زنده ماندن سلول‌ها با آزمون MTT مورد آزمايش قرار گرفت و بيان ژن هاي RPE65 و PAX6 با استفاده از روش Real-PCR انجام شد. نتايج با نمونه كنترل كشت داده شده در FBS مقايسه گرديد. ميزان تغييرات بيان هر ژن در تيمارهاي مختلف نسبت به كنترل و با توجه به ژن داخلي GAPDH بر طبق روش2-∆∆Ct مقايسه شد و نتايج به دست آمده در قالب نمودار ستوني با يكديگر مقايسه شدند. نتايج: هفت روز پس از شروع كشت عملكرد و رشد سلول‌‌هاي RPE بصورت معني داري (0/05>P) در ژل30% پلاكتي بالاتر از ژل پلاكتي10% بود. بيان ژن RPE65 نيز در كشت‌هاي تيمار شده با ژل 20 و 30% بصورت معني داري (0/05>P) بيشتر از كشت‌هاي حاوي ژل سرم گاوي بود، اما تفاوت آماري از نظر بيان ژن PAX6 بين نمونه ‌هاي كشت داده شده در درصد‌هاي مختلف از ژل مشاهده نشد. نتيجه‌گيري: مطالعه حاضر نشان داد كه استفاده از ژل پلاكتي سبب بهبود ماندگاري و حفظ ماهيت سلول‌‌هاي RPE كشت داده شده مي‌شود. نتايج اين مطالعه براي بهينه سازي برنامه ريزي سلول درماني در آينده اميدواركننده است.

Background and Objective: Degradation of human retinal pigment epithelium (hRPE) during some disorders such as aging is associated with severe impairment of ocular optical receptor function. Cellular and tissue transplantation of RPE layer is one of the treatment options that has been considered in recent years. The use of platelet gel has shown beneficial effects on the growth of various cultured cells.This study was conducted to investigate the effects of three different concentrations of platelet gel on the viability and the expression of PAX6 and RPE65 genes of cultivated RPE cells. Materials and Methods: hRPE cells extracted from the human eye were cultured in plates containing platelet gel (PL) of different concentrations (10%, 20%, and 30%). Cells viability was tested by MTT test and the expression RPE65 and PAX6 genes were analyzed by using real time PCR. The number of expression changes of each gene in different treatments compared to the control and according to the internal GAPDH gene was calculated according to the 2-∆∆Ct method and the results were compared with each other in a bar chart. Results: After 7 days, cultivated hRPE cells in culture media containing 30% PL showed a high rate of viability in comparison with those cultured in 10% PL (p < 0.05). RPE65 gene expressions in cell cultures treated with 20% and 30% PL were higher than controls (p < 0.05). However, there was no significant difference in the expression of PAX6 gene between the cell cultures treated with 20% and 30% platelet gels. Conclusion: our results showed that using platelet gels in hRPE cell cultures can improve cell viability and identity, which can be promising for optimizing future clinical cell therapy strategies.