ارزيابي تكوين و بيان ژن‌هاي Bcl-2, Bax و ErbB4 پس از انجماد شيشه‌اي جنين‌هاي هشت سلولي و بلاستوسيست

Evaluating the Development and the Expression of Bax, Bcl-2, and ErbB4 Genes following Vitrification of Eight Cell and Blastocyst Embryos

زمينه و هدف: تكنيك انجماد شيشه‌اي يك روش مناسب براي نگه داري جنين مي‌باشد. طي اين فرآيند، ژن‌هاي دخيل در لانه گزيني و آپوپتوزي تغيير يافته و مي‌تواند بر كيفيت جنين‌ها تاثير گذارد؛ لذا در اين مطالعه بيان ژن‌هاي Bcl-2, Bax به عنوان ژن‌هاي آپوپتوزي وErbB4 به عنوان ژن لانه گزيني در جنين‌هاي منجمد و گرم شده موشي بررسي گرديد. مواد و روش‌ها: موش‌هاي ماده نژاد NMRI 8-6 هفته با استفاده از تزريق IU5/7 PMSG و 48 ساعت بعد IU 5/7 HCG تحريك تخمك گذاري و سپس در كنار موش نر قرار داده شدند. پس از بررسي پلاك واژني، جنين‌هاي 8 سلولي جمع آوري شده و به سه گروه شامل گروه كنترل (جنين‌هاي تازه)، گروه آزمون يك (جنين‌هاي 8 سلولي منجمد شده) و گروه آزمون دو (جنين‌هاي بلاستوسيست منجمد شده) تقسيم شدند. در پايان پس از استخراجRNA ، بيان ژن‌هاي Bcl-2, Bax و ErbB4 با تكنيك Real time PCR ارزيابي گرديد. داده‌هاي حاصل با آزمون Chi-Square و ANOVA مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج: نتايج اين مطالعه نشان داد كه ميزان تشكيل بلاستوسيست ثانويه و دژنراسيون بين سه گروه مطالعه تفاوت معني داري نداشت و ميزان بيان ژن‌هايBax و Bcl2و ErbB4بين سه گروه تفاوت معني داري نداشت. نتيجه‌گيري: فرآيند انجماد و گرم كردن در مرحله هشت سلولي و بلاستوسيست تاثيري نامطلوبي بر ميزان تكوين جنين‌ها نداشته و در بيان ژن‌هاي Bax و Bcl2و ErbB4 تاثير منفي ندار

Background & Objective: Vitrification is an effective mean for preserving embryos. During this process, expression of implanting and apoptotic genes changes and can affect the quality of embryos. In this study, the expressions of Bax and Bcl-2 as apoptotic genes and ErbB4 as implanting gene were investigated in vitrified and warmed embryos. Materials & Methods: In this study, six-eight week old female (NMRI) mice were used. Their ovaries were hyper stimulated with 7.5 IU PMSG and 7.5 IU HCG. Females were mated with males from the same strain and inspected for the presence of vaginal plugs on the following morning. Females with the presence of vaginal plugs were considered to be pregnant and were killed 62 h post HCG injection. 8-cells embryos were flushed from oviduct and were divided to three experimental groups including fresh, vitrified eight-cell embryos and vitrified blastocyst embryos. Finally, RNA was extracted and expression of Bax, Bcl-2, and ErbB4 genes was evaluated by Real time PCR. Data were analyzed by Chi-square and ANOVA tests. Results: The results of this study showed that there was not any significant difference in blastocyst formation and degeneration between three experimental groups. In addition, there was not any significant difference in relative gene expression of Bax, Bcl-2, andErbB4 between all the three groups. Conclusion: According to the result of this study, vitrification-thawed process does not have any unpleasant effect on the development of eight cell and blastocyst embryos. It does not have negative effect on Bax, Bcl2, and ErbB4 genes expression.