اثر ايمونومدولاتوري اگزوتوكسين A نوتركيب پسودوموناس بر سلول‌هاي دندريتيكي استخراج شده از طحال موش

The Immunomodulatory Effect of Recombinant Exotoxin A of Pseudomonas Aeruginosa on Dendritic Cells Extracted from Mice Spleen

زمينه و هدف: با توجه به نقش كليدي سلول دندريتيك در ايجاد پاسخ سيستم ايمني بر عليه آنتي ژن‌هاي ميكروبي و بيماري‌ها، در اين مطالعه اثر پروتئين نوتركيب اگزوتوكسين A باكتري پسودوموناس آئروژينوزا در بلو غ و فعال‌سازي سلول‌هاي دندريتيك مورد بررسي قرار گرفت. مواد و روش‌ها: با استفاده از DNA باكتري پسودوموناس آئروژينوزا پروتئين نوتركيب اگزوتوكسين A ساخته شد و اثر سيتوتوكسيك آن بر سلول دندريتيك به وسيله تست MTT مورد مطالعه قرار گرفت. همچنين اثر اين آنتي ژن بر بيان مولكول‌هاي CD40، CD86 و MHCΠ بر روي سلول‌هاي دندريتيك با استفاده از تكنيك فلوسايتومتري مورد بررسي قرار گرفت. علاوه بر اين‌ها اثر اين آنتي ژن بر تكثير سلول T به وسيله واكنش مختلط لنفوسيتي (MLR) و ترشح سايتوكاين‌هاي IL-4 و IFN-γ بررسي شد. همچنين اثر اين آنتي ژن بر توليد IL-12 توسط سلول‌هاي دندريتيك به كمك تكنيك ELISA بررسي شد. نتايج حاصل به وسيله تست آماري one way ANOVA مورد بررسي قرار گرفت. نتايج: اگزوتوكسين A بقاء سلول دندريتيك را كاهش نداد و همچنين ميزان بيان مولكول‌هاي كمك تحريكي CD40، CD86 و MHCΠنسبت به كنترل منفي تغيير معني داري پيدا نكرد. اين آنتي ژن ميزان تكثير سلول T را كاهش داد و اين كاهش تكثير در غلظت 1/0 معني دار بود. ميزان ترشح IL-12 توسط سلول دندريتيك تحت تاثير اين آنتي ژن افزايش يافت ولي ميزان ترشح IL-4 و IFN-γ در تستMLR كاهش معني داري را نشان نداد. نتيجه‌گيري: اين آنتي ژن باعث تغيير در ترشح سايتوكاين‌ها توسط سلول‌هاي ايمني شده و تكثير سلول‌هاي T را كاهش مي‌دهد.

Background & Objective: Dendritic cell (DC) is as a key cell in activation of immune response against microbes and disease. Therefore, the effect of recombinant exotoxin A of Pseudomonas aeruginosa on the maturity and the activation of DCs was evaluated in this study. Materials & Methods: Recombinant exotoxin A was produced from Pseudomonas aeruginosa DNA. MTT assay was used to evaluate the cytotoxicity of this protein on DCs. The expression of co-stimulatory molecules CD40, CD86, and MHCΠ was evaluated by flow cytometry. Moreover, the effect of this antigen (Ag) on T-cell proliferation was evaluated using Mixed Lymphocyte Reaction (MLR) assay and the secretion of IL-4 and IFN- γ. Secretion of IL-12 by DCs was measured with Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) method. The data were collected and analyzed with one way ANOVA test. Results: Recombinant exotoxin A had no effect on DCs viability. In addition, expression of CD40, CD86, and MHCΠ did not change significantly compared to the negative control cells. Moreover, T-cells proliferation was decreased significantly at the concentration of 0.1µg/ml of this Ag. The secretion of IL-12 was increased by DCs, in contrast the secretion of IL-4 and IFN-γ in MLR supernatant did not decrease significantly. Conclusion: Exotoxin A decreases the proliferation of T-cells and also leads to a change in the pattern of cytokine secretion of immune cells.