توالي يابي پيروسكانسينگ و كاربردهاي آن در علوم زيستي

Pyrosequencing and its application in biological science

تعيين توالي DNAاز مهم­ترين روش­ها جهت شناسايي ترتيب نوكلئوتيد­هاست. با­توجه به پيشرفت­ هاي چشمگير در اين زمينه، روش توالي­يابي پيروسكانسينگ (Pyrosequencing) ابداع شده است كه علاوه بر تعيين توالي DNA، كاربردهاي متعددي نيز دارد. استفاده از اين روش در علم پزشكي و زيست فناوري بويژه در زمينه چندشكلي هاي تك - نوكلئوتيدي (SNP)، شناسايي ميكروب­هاي بيماري­زا و غيربيماري­زا، متيلاسيون DNA، شناسايي جهش در ژن­هاي مهم درگير در بيماري ها است. اين روش، بر پايه سنتز است و سيستم آنزيمي استفاده شده در اين روش شامل چهار آنزيم منحصر بفرد DNA Polymerase Klenow، ATP sulfurylase، Luciferase و Apyrase است. آزاد شدن نور حاصل از آنزيم لوسيفراز تعيين كننده نوع نوكلئوتيد قرارگرفته در زنجيره DNA بوده، پيك ­هاي مربوط به هر نوكلئوتيد در پيروگرم ظاهر مي­ شود. آغازگر استفاده شده در اين روش انعطاف­پذير بوده، همين ويژگي منحربفرد، منجر به كارايي بالاي آن شده است. عدم استفاده از مواد پرهزينه، برخلاف ديگر روش­ هاي توالي­يابي، از مزاياي ديگر اين روش محسوب مي ­شود.

Determining the DNA sequence is one of the most important techniques for identifying the sequence of nucleotides. In order to the remarkable advances in this field, pyrosequencing technique was created, has several applications in addition to determining the sequence of DNA. The use of this technique is in medical sciences and biotechnology, especially in the field of single nucleotide polymorphism, the identification of pathogenic and non-infectious microbes, DNA methylation, the identification of mutations in the major genes involved in the disease. This technique is based on synthesis and the enzyme system used in this method consists of four unique DNA Polymerase Klenow, ATP sulfurylase, Luciferase and Apyrase enzymes. Releasing of light produced by the enzyme luciferase determines the type of nucleotide present in the DNA chain, and the peaks of each nucleotide appear in the Pyrogram. The primer used in this method is flexible, and this unique feature has led to its high performance.Without using expensive materials, unlike other sequencing methods, is another advantage of this method.