عنوان مقاله :
كلون، بيان و تخليص پروتئين نوتركيب هماگلوتينين ويروس آنفلوانزا H1N1 انساني در رده‌ي يوكاريوتيك سلول حشره با استفاده از وكتور باكولوويروس
عنوان به زبان ديگر :
Cloning, Expression, and Purification of the Recombinant Hemagglutinin of Human Influenza Virus H1N1 in the Eukaryotic Insect Cells Using Baculovirus Vector
پديد آورندگان :
راشدي، نيلوفر دانشگاه آزاد اسلامي، واحد شهركرد - گروه زيست‌شناسي، شهركرد، ايران , تقي‌زاده، مرتضي دانشگاه آزاد اسلامي، واحد شهركرد - گروه زيست‌شناسي، شهركرد، ايران , محمدي‌نژاد، پريسا دانشگاه آزاد اسلامي، واحد شهركرد - گروه زيست‌شناسي، شهركرد، ايران , مهدوي، مهدي دانشگاه آزاد اسلامي، واحد شهركرد - گروه زيست‌شناسي، شهركرد، ايران , جلالي‌راد، رضا دانشگاه آزاد اسلامي، واحد شهركرد - گروه زيست‌شناسي، شهركرد، ايران
كليدواژه :
ويروس آنفلوانزا نوع A , باكولوويروس , زيرگروه H1N1 , هماگلوتينين , سلول Sf9
چكيده فارسي :
مقدمه: ويروس آنفلوانزا H1N1 به عنوان عامل بيماري‌زا و تهديد كننده‌ي حيات انسان مطرح مي‌شود. واكسيناسيون، از راه‌هاي مؤثر براي پيش‌گيري و مهار بيماري آنفلوانزا است. توليد پروتئين نوتركيب هماگلوتينين در سيستم بياني باكولوويروس، در بستر سلول يوكاريوت حشره (Sf9) به عنوان يك راهكار مؤثر پيشنهاد شده است.
روش‌ها: توالي ژن هماگلوتينين ويروس آنفلوانزا H1N1 از National Center for Biotechnology Information (NCBI) استنتاج و پس از طراحي پرايمر اختصاصي، توالي با استفاده از هضم آنزيمي در پلاسميد pFastBacHTA كلون گرديد و براي توليد يك بكميد نوتركيب به سلول DH10Bac انتقال داده شد. پس از استخراج پلاسميد مربوط و تأييد صحت كار، به داخل سلول حشره ترانسفكت گرديد و بعد از بيان پروتئين توسط سلول Sf9، با روش Sodium dodecyl sulfate-Polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) و Western blot، حضور پروتئين نوتركيب تأييد شد.
يافته‌ها: ژن هماگلوتينين با طول 654 جفت‌باز در پلاسميد pFastBacHTA به كمك دو آنزيم BamHI و Xhol ساب كلون گرديد. سلول حشره بعد از دريافت بكميد نوتركيب، پروتئيني به وزن تقريبي 60 كيلودالتون را بيان نمود. پس از استخراج پروتئين، با روش‌هاي SDS-PAGE و Western blot تأييد انجام گرفت و با روش Lowry، غلظت پروتئين اندازه‌گيري شد.
نتيجه‌گيري: سيستم بياني باكولوويروس براي توليد پروتئين‌هايي با ساختار پيچيده مفيد است. به طور كلي، از اين طرح مي‌توان به اين نتيجه رسيد كه اين پروتئين در سلول حشره به ميزان بالايي بيان مي‌شود و به دليل تشابه سيستم آن با سيستم انساني، مي‌تواند در آينده به عنوان جايگزين مناسب براي تخم‌مرغ‌هاي جنين‌دار در زمينه‌ي واكسيناسيون مورد استفاده قرار گيرد.
چكيده لاتين :
Background: The H1N1 influenza virus is a highly pathogenic virus that threatens human life. Vaccination is an
effective way of preventing and controlling influenza. Production of recombinant hemagglutinin in the baculovirus
expression system, in the insect eukaryotic cell substrate (Sf9), has been suggested as an effective strategy.
Methods: The H1N1 influenza virus hemagglutinin gene sequence was prepared from National Center for
Biotechnology Information (NCBI). After designing a specific primer, the sequence was provided using
restriction digestion, cloned into pFastBacHTA plasmid, and transferred to the DH10Bac cell to produce a
recombinant bacmid. After extracting the relevant plasmid, it was transfused into the insect cell; and after the
expression of the protein by Sf9 cell, the presence of recombinant protein was confirmed using sodium dodecyl
sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blot methods.
Findings: The hemagglutinin gene (654 bp) was cloned in pFastBacHTA plasmid using the two enzymes of
BamHI and Xhol. Sf9 cell expressed a protein weighing approximately 60 kDa after receiving the recombinant
bacmid protein. The extracted protein was identified and confirmed using SDS-PAGE and Western blot
methods; and protein concentration was measured by Lowry method.
Conclusion: The baculovirus system is useful for the production of proteins with complex structures. Generally, it can be concluded that this protein is highly expressed in insect cells. Due to the similarity of this system with the
human system, it can be a suitable alternative for embryonic eggs in the future, and can be used in vaccination.
عنوان نشريه :
مجله دانشكده پزشكي اصفهان
